細菌內毒素檢查法標準內毒素的稀釋的要求

　　細菌內毒素檢查法在藥品生產和檢測過程中具有重要意義。根據《美國藥典》規定，應使用國家參考標準內毒素（RSE），復溶后應旋渦振蕩不少于20分鐘，并在冰箱中保存不超過14天。再次使用前需要強烈旋渦振蕩不少于5分鐘，每一步稀釋前被稀釋液也要旋渦振蕩不少于1分鐘，不能使用保存的稀釋液。此外，美國鱟試劑廠家供應的工作標準內毒素（CSE）在使用說明書中也對內毒素的復溶和稀釋有使用旋渦混合器震蕩的要求。同樣，世界衛生組織及各國藥典中的細菌內毒素檢查法也對標準內毒素的稀釋有震蕩混合的要求。

　　為什么對標準內毒素的稀釋有如此特殊的要求呢？這與內毒素的化學成分與結構有關。內毒素是具有疏水和親水雙重活性的兩性分子，多糖鏈具有親水性，而脂肪鏈具有疏水性。當內毒素溶于水或稀釋時，其親水性糖鏈朝向水和水接觸，而疏水性的脂質鏈部分卻背向水。這導致內毒素的疏水端自然聚集成團，形成直徑約為0.1μm的雙層殼狀或泡囊。脂質A藏于聚集團的內部或貼附于器皿上，而脂質A是激活鱟試劑的主要部分。由于其疏水性，脂質A在水溶液中不能與鱟試劑充分接觸，這可能導致檢測到的內毒素含量偏低。

　　實驗結果表明，同一批號的國家參考標準內毒素在稀釋時震蕩與否結果相差很大。如果采用旋渦震蕩法稀釋內毒素，其效價測定的結果與國際參考標準內毒素（IS）基本一致；如果不經振蕩稀釋，則測定的效價要比國際參考標準內毒素低50%～75%。因此，為了獲得準確的效價，內毒素在稀釋時必須充分振蕩。

在實施1995年版的《中國藥典》之前，我國相當部分的鱟試劑在標定靈敏度時并未采用振蕩稀釋內毒素的方法，這導致標定的靈敏度高于實際值100%～300%。這意味著鱟試劑用戶在使用比標示靈敏度高1～3倍的鱟試劑進行細菌內毒素檢查。這一現象引起了《美國藥典》以及世界衛生組織等機構的關注，并一直強調和推動在藥品生產和檢測過程中應嚴格遵守規定，以確保公眾的健康安全。

　　總之，根據《美國藥典》和其他相關規定，對細菌內毒素檢查過程中使用的標準內毒素進行復溶和稀釋時，必須遵循特定的程序和要求。這包括使用旋渦振蕩器進行充分振蕩、在冰箱中保存不超過14天、再次使用前進行強烈旋渦振蕩以及每一步稀釋前對被稀釋液進行旋渦振蕩。這些要求是基于對內毒素化學成分和結構的理解而制定的，旨在確保準確檢測內毒素含量并保障公眾健康安全。