細菌對于蛋白質和氨基酸的代謝試驗

   細菌對于蛋白質和氨基酸的代謝原理為：不同種類的細菌分解蛋白質的能力不同。細菌對蛋白質的分解，一般先由胞外酶將復雜的蛋白質分解為短肽（或氨基酸），滲入菌體內，然后再由胞內酶將肽類分解為氨基酸。具體試驗方法有：①明膠液化試驗；②吲哚試驗（靛基質試驗）；③硫化氫試驗；④尿素酶試驗；⑤苯丙氨酸脫氨酶試驗；⑥氨基酸脫羧酶試驗。

　　1.明膠液化試驗

　　（1）原理：某些細菌可產生一種胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸，從而失去凝固力，半固體的明膠培養基成為流動的液體。

　　（2）方法：將被檢菌穿刺接種于明膠培養基，于22℃培養7d，逐日觀察結果。若用35℃孵育，因明膠在此溫度下自行液化，故在觀察結果前，先置4℃冰箱內30min，再看結果。

　　（3）結果：培養基呈液化狀態為陽性。

　　（4）應用：腸桿菌科細菌的鑒別，如沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠，而其他細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外多數假單胞菌也能液化明膠醫學教|育網搜集整理。

　　2.吲哚（靛基質）試驗

　　（1）原理：某些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基質），當加入吲哚試劑（對位二甲氨基苯甲醛）后則形成紅色的玫瑰吲哚。

　　（2）培養基：蛋白胨水培養基。

　　（3）方法：將待檢菌接種于上述培養基中，于35℃培養24～48h，沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。

　　（4）結果：于兩者液面接觸處出現紅色為陽性，無色為陰性。

　　（5）應用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。

　　3.硫化氫試驗

　　（1）原理：某些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）產生硫化氫，硫化氫遇鉛或亞鐵離子則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。此試驗可間接檢測細菌是否產生硫化氫。

　　（2）培養基：醋酸鉛培養基。

　　（3）方法：將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養基，于35℃培養24～48h觀察結果。

　　（4）結果：培養基變黑為陽性，不變為陰性。

　　（5）應用：主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細菌，絕大多數硫化氫陽性，其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

　　4.尿素分解試驗

　　（1）原理：某些細菌具有尿素分解酶，能分解尿素產生大量的氨，使培養基呈堿性。

　　（2）培養基：尿素培養基。

　　（3）方法：將待檢菌接種于尿素培養基，于35℃培養18～24h觀察結果。

　　（4）結果：培養基呈堿性，使酚紅指示劑變紅為陽性，不變為陰性。

　　（5）應用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細菌的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽性。另外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽性，而斯氏和產堿普羅威登菌陰性。

　　5.苯丙氨酸脫氨酶試驗

　　（1）原理：某些細菌可產生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化鐵試劑后產生綠色反應。

　　（2）培養基：苯丙氨酸瓊脂培養基。

　　（3）方法：將被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂培養基斜面上，于35℃培養18～24h，滴加10％三氯化鐵試劑3～4滴，自斜面上方流下。

　　（4）結果：出現綠色為陽性。應立即觀察結果，延長反應時問會引起褪色。

　　（5）應用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬細菌均為陽性，腸桿菌種中其他細菌均為陰性。

　　6.氨基酸脫羧酶試驗

　　（1）原理：具有氨基酸脫羧酶的細菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺，鳥氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和二氧化碳，使培養基變堿。使指示劑顯示出來。

　　（2）培養基：氨基酸脫羧酶培養基和氨基酸對照培養基。

　　（3）方法：將被檢菌分別接種于賴氨酸（或鳥氨酸或精氨酸）培養基和氨基酸對照培養基中，并加入無菌液體石蠟或礦物油，于35℃培養l～4d，每日觀察結果醫學教|育網搜集整理。

　　（4）結果：對照管應呈黃色，測定管呈紫色（指示劑為溴甲酚紫）為陽性，若測定管呈黃色為陰性。若對照管呈現紫色則試驗無意義，不能作出判斷。

　　（5）應用：主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。如沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外，其余沙門菌的賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶均為陽性。志賀菌屬除宋內和鮑氏志賀菌外，其他志賀菌均為陰性。