細菌ATP／ADP／AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑盒

發布時間：2020-08-25 11:04 原文鏈接：細菌ATP／ADP／AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑盒

　　細菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑盒

　　產品說明書（中文版）

　　主要用途

　　細菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑是一種旨在通過高氯酸酸性處理，堿性中和后，在高效液相色譜儀和紫外光度儀下（254nm波長）檢測分析，分離出ATP、ADP或AMP波峰，以定量測定樣品中腺嘌呤核苷酸含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌樣品中ATP、ADP、AMP的含量檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

　　技術背景

　　腺嘌呤核苷酸（adenine nucleotides），簡稱腺苷，包括單磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，是一種單體單位，為核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）的組成成分，并提供化學能量，在能量代謝通路中維護諸如肌肉、胞膜等組織細胞結構的生化和生理功能，調節細胞糖酵解、三羧酸循環、電子傳遞系統、氧化磷酸化活動。腺嘌呤核苷酸在細胞中濃度低，且不穩定，通常通過其類型不同、濃度差異、分布狀況，來評價細胞的代謝情況和能量狀態。單磷酸腺苷（Adenosine monophosphate；AMP），又稱為5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸（5'-adenylic acid），是一種在（脫氧）核糖核酸中發現的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸基團、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。分子式為C10H14N5O7P，分子量347。AMP可以通過腺苷酸激酶（adenylate kinase）催化2分子ADP生成，或通過ATP以及ADP水解產生。AMP常以腺苷-3',5'-環化一磷酸（cAMP）形式存在于細胞中。AMP與ATP之比反映細胞ATP生成狀況以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷（adenosine diphosphate；ADP），參與ADP-ATP循環，提供熱能轉換和動態平衡。三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代謝活躍的細胞內，是細胞活力的標志。一旦細胞凋亡或壞死，ATP濃度急遽下降。通過高氯酸酸性處理，排除蛋白質干擾，堿性中和后，在高效液相色譜儀和紫外光度儀下（254nm波長）檢測分析，分離出ATP、ADP、AMP波峰，以定量其含量。

　　產品內容

　　酸性液（Reagent A） 5毫升

　　中和液（Reagent B） 1毫升

　　流相液A（Reagent C） 500毫升

　　流相液B（Reagent D） 500毫升

　　標準液（Reagent E） 500微升

　　產品說明書 1份

　　保存方式

　　保存標準液（Reagent E）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；酸性液（Reagent A）和中和液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

　　用戶自備

　　1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

　　4℃（微型）臺式離心機：用于樣品操作

　　高效液相色譜儀（HPLC）：用于定量測定

　　實驗步驟

　　樣品準備

　　準備好待測細菌樣品

　　進行細菌計數：在分光光度儀上測定OD600或直接計數

　　轉移到預冷的1.5毫升離心管

　　放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）

　　小心抽去上清液，保留沉淀顆粒

　　加入200微升預冷的酸性液（Reagent A）

　　渦旋震蕩1分鐘

　　轉移到1.5毫升離心管

　　放進4℃微型臺式離心機再次離心10分鐘，速度為6000g

　　小心移取上清液到新的1.5毫升離心管

　　加入31微升中和液（Reagent B），充分混勻

　　置于冰槽里靜置30分鐘

　　即刻移入上清液到新的1.5毫升離心管（注意：避免移取沉淀顆粒）

　　放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里待測

　　二、測定準備

　　開啟儀器預熱15分鐘

　　根據下表設置高效液相色譜儀（HPLC）參數

　　參數