聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）分離血清蛋白質（圖）

一、目的：

1．學習聚丙烯酰胺凝膠電泳原理。

2．掌握聚丙烯酰胺園盤電泳的操作技術。

3．比較醋酸纖維薄膜電泳與本法分離血清蛋白質的效果。

二、原理：

（一）盤狀電泳原理

盤狀電泳是在區帶電泳原理的基礎上，以孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠作為支持物，采用電泳基質的不連續體系（即凝膠層的不連續性、緩沖液離子成分的不連續性、pH的不連續性及電位梯度的不連續性），使樣品在不連續的兩相間積聚濃縮成很薄的起始區帶（厚度為10-2厘米），然后再進行電泳分離。

盤狀電泳名稱來源即由于此法的原理是依靠基質不連續性（discontinuity），湊巧分離出的區帶也很象圓盤狀（discoid  shape），取“不連續性”及“圓盤狀”的英文字頭“disc”。因此，英文名稱為disc electrophoresis，中文直譯為盤狀電泳。

儀器裝置：（見圖15-1）。上下兩個槽為圓形或方形，其中注入緩沖液。上下槽的緩沖液中分別有正、負電極通入。上槽底部有很多小孔，可插入裝有聚丙烯酰胺凝膠的玻璃管。

這里僅以Davis和Orstein（1964）用分析血清蛋白的高pH的不連續系統為便說明其基本原理。此系統是一個高pH的堿性系統，或稱陰離子系統，最初用于分析血清蛋白，但也適用于其他的酸性和中性蛋白。很多細胞蛋白質，或病毒的結構蛋白在此系統中（pH8～9）解離成陰離子，向陽極移動。系統由下列三種不連續的凝膠組成。即在每支玻璃管中裝有三層不同的凝膠（見圖15-2）。最上層為樣品膠，中層為濃縮膠（又稱間隔膠或積層膠），下層為分離膠（又稱電泳膠）。