5、鼻咽癌
(1)二甲基膽蒽(MC)誘發大鼠鼻咽癌
① 取直徑2~3 mm的硬質塑米管,在酒精燈上小火拉成錐形,每段長約3.5 cm,管內填以結晶體MC。
② 小管一端用火封閉,以防藥物外溢,尖端用針刺數孔,使MC能從小妃溢出。
③ 取體重120 g左右的大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,由前鼻孔將上述含MC的塑料小管插入鼻腔,利用前鼻孔較小管粗端為小的特點,稍加用力,迫使小管全部進入鼻腔內,其尖部可達鼻咽腔。不需另加固定,即可使小管長期留于鼻腔內。
④ 待到預定時間(半年以上),或動物自行死亡時,到其鼻咽部,10%福爾馬林固定,脫鈣后,石蠟包埋,進行連續切片。發癌率可達60%以上。
(2)二乙基亞硝胺滴鼻法誘發鼻咽癌
① 取120 g左右大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,用磨平針尖的8號針頭,從前鼻孔輕輕插入,針尖可達鼻咽腔;
② 經注射器灌注用1%吐溫-80新配的 33.3%DEN混懸液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次,共15~20次,可誘發成鼻咽癌。
6、宮頸癌
二甲基膽蒽(MC)誘發宮頸
取雌性小白鼠,以附有0.1 mgMC的棉紗線結在動物不麻醉的狀態下,借助于陰道擴張器及磨純的彎針,將線穿入宮頸。經右宮角背部穿出,使線結固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉,縫合皮膚,掛線以后,同日開始連續注射青霉素2~3天。以防術后感染。至一定時間(半年左右)處死動物,宮頸組織用10%福爾馬林固定,石蠟包埋,連續切片。
7、結腸癌
二甲基芐肼(Dimethlhydrazine,DMH)誘發鼻咽癌
① 給四周齡的雄性大白鼠,皮下注射二甲基芐肼(Dimethlhydrazine,DMH)每周一次,連續21周,每次 DMH21 mg/kg;
② 最后一次給藥后1~4周,處死動物;
③ 降結腸部位用Bouin液固定,脫水,石蠟包埋,切片。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液,并加EDTA37 mg,用氫氧化納(0.1 N)液將pH調至6.5備用。
注意事項:
1、要設計不同的實驗組和對照組, 每組動物數一般為 5-10 只;
2、一般接種腫瘤6-8 周后,小鼠的腫瘤可生長至直徑為 15-20mm ( 即小鼠會瀕臨死亡) 時, 可眼球取血,分離血清并保存血清, 處死小鼠, 取腫瘤組織照相, 取部分腫瘤組織作 冰凍組織切片( 或- 80℃ 保存), 作相應的免疫組織化學染色 , 取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定, 石臘包埋, 作常規HE 染色。
其他:
1、芳香胺及偶氮染料類致癌物的特點
(1)通常需要長期、大量給藥才能致癌;
(2)腫瘤多發生于遠隔作用部位的器官如膀胱、肝等;
(3)有明顯的種屬差異;
(4)其本身不是直接致癌物,致癌是由于其某種代謝產物的作用;
(5)其致癌作用往往受營養或激素的影響,例如,奶黃僅在以缺少蛋白質和核黃素的飼料喂飼大鼠時才引起肝癌,而且雄性大鼠較敏感,鄰位氨基偶氮甲苯則易起雌性大鼠的肝癌。
2、亞硝胺類的致癌特點
(1)致癌性強,小劑量一次給藥即可致癌;
(2)對多種動物(包括猴、豚鼠等不易誘發腫瘤的動物)的許多器官(包括食管、腦、鼻竇等不易引起癌的器官)能致癌,甚至可以通過胎盤致癌,如給懷孕大鼠以二乙基亞硝胺(Diethy lnitrosamine,DEN)可比較快地引起仔鼠的神經膠質細胞瘤;
(3)具有不同結構的亞硝胺有明顯的器官親和性,例如二甲基亞硝胺等對稱的衍生物常引起肝癌,不對稱的亞硝胺如甲基芐基亞硝胺常誘發食管癌;在大鼠,二丁基亞硝胺能引起膀胱癌,二戊基亞硝胺能誘發肺癌,而N-甲基-N-硝基-N-1-亞硝基胍則能引起胃腸癌。
3、黃曲霉毒素的致癌特點
(1)黃曲霉毒素的毒性很強,很小劑量(1mg/kg體重)即可使狗、幼齡大鼠、火雞或小鴨致死;
(2)其致癌性也極強,最小致癌劑量比亞硝胺還要小數十倍,是已知化學致癌物中作用最強者;
(3)它能誘發多種動物(從魚到猴)的肝癌,也可引起腎、胃及結腸的腺癌,滴入氣管內可引起肺鱗狀細胞癌;
(4)注入皮下可引起局部的肉瘤,還有報告認為,它可引起淚腺、乳腺、卵巢等其它部位的腫瘤。
4、其他
在動物實驗中早已確定:乙硫氨酸可誘發大鼠肝癌;烏拉坦(氨基甲酸乙酯,C2H5O-CONH2)、氨乙胺可引起小鼠的肺癌;一些鹵代烴如四氯化碳、氯仿等可引起大鼠或小鼠的肝癌。
三、自發型腫瘤動物模型
實驗方法原理:自發性腫瘤動物模型是指未經人為處理;自然發生的腫瘤動物模型,主要有自發性乳腺癌模型和自發性白血病模型。
實驗材料:C3H小、鼠、A系小鼠、CGA小鼠
試劑、試劑盒:受試藥
儀器、耗材:記號筆、腳規
實驗步驟:
1、自發性乳腺癌小鼠模型類型
① C3H小鼠:繁殖用雌鼠自發性乳腺癌發生率為85%~100%
② A系小鼠: 經產雌鼠乳腺腫瘤發生率為30%~80%
③ CBA小鼠:雌鼠自發性乳腺癌發生率為60%~65%
2、在乳腺左右兩側及乳頭部均可發生腫瘤。每只小鼠常見1個以上腫瘤。選擇腫瘤數目和大小相近的動物, 配對分組,給予受試藥,觀察受試藥對腫瘤發展的影響。
3、給藥方案和給藥途徑可根據受試藥物的特點確定。因自發性乳腺癌發展較緩慢,故采用間歇給藥或小劑量連續給藥較為合適。
4、結果判定
① 給藥后每天觀察腫瘤生長情況,記錄發生時間和位置;
② 腫瘤結節長到一定程度,每周用腳規測量皮下腫瘤2次。測定腫塊的最大徑(a)和最小徑(b)。腫瘤體積(cm3) = ab2/2;
③ 將腫瘤體積變化對時間作出生長曲線,可由曲線的斜率變化判斷藥物抑制腫瘤生長的作用,尤其應觀察腫瘤能否完全消退。