實驗概要
致癌化學物轉化細胞
實驗步驟
1．取材：妊娠后第13天取材，取數個同窩胚胎，去頭和內臟，在無菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養液、制備成細胞懸液、接種入1875px/培養瓶中，接種密度10～20×106/1875px，37℃培養2～3天，在順利情況下能迅速長滿瓶面。
2．貯存：選大批生長狀態良好的細胞凍存，儲以備用。
3．致癌物處理：取凍存細胞，解凍，接種于25ml培養瓶中，每瓶含細胞10萬～30萬。待細胞生長進入指數增生期時，向培養瓶中加入致癌劑MNNG。致癌劑量1～3微克/毫升營養液。在37℃溫箱中培養12～48小時。
4．低血清培養：棄掉MNNG作用液，用溫PBS洗1～3次，加入含20％小牛血清，繼續置溫箱中培養2～3周，然后改用含5％血清培養液培養。低血清培養液不利于正常細胞生長，但已轉化的細胞仍能增殖和形成轉化灶。
5．轉化灶形成和分離：在成功情況下，用致癌物處理過的細胞于10天后在正常細胞之間，可產生數量不等的轉化灶。