熒光光譜儀又稱熒光分光光度計,是一種定性、定量分析的儀器。通過熒光光譜儀的檢測,可以獲得物質的激發光譜、發射光譜、量子產率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。
熒光光譜儀靈敏度高,無破壞性和選擇性好,是研究小分子與核酸相互作用的主要手段,被廣泛應用于化學、環境和生物化學領域。
熒光光譜儀原理:
根據物質分子吸收光譜和熒光光譜能級躍遷機理,具有吸收光子能力的物質在特定波長光(如紫外光)照射下可在瞬間發射出比激發光波長長的熒光,利用物質的熒光光譜進行定性、定量分析的方法稱為熒光分析法。熒光光譜輻射峰的波長與強度包含許多有關樣品物質分子結構與電子狀態的信息,但外界因素對其熒光強度結果有一定的影響。
當某些物質受到紫外線照射時,會發射出各種顏色和不同強度的可見光,當紫外線停止照射時,所發射的光線會隨即消失,人們將這種光線稱為熒光。熒光由一種能發熒光的物質-螢石而得名。熒光的產生主要包括物質分子對光能的選擇性吸收、激發和分子的去活化三個過程。
光在通過物質的過程中,由于某些頻率的光被吸收而強度減弱,這一現象被稱為物質對光的吸收。原子、分子或者離子都具有不連續的、數目有限的量子化能級結構,且只能吸收與兩能級之差相同或為整數倍的能量。當所照射的光線和所被測物質的分子具有相同的頻率時,入射光才能夠該物質的分子所吸收。由于不同物質的特征能級不同,所以它們所吸收的光的波長和顏色也是有區別的,即它們所吸光能量也是不一樣的,每種物質都有其特有的吸光光譜。
熒光時物質在吸收入射光之后所發射的輻射,因此,溶液的熒光強度與該溶液的吸收的入射光強度以及該物質的熒光量子產率有密切關系。熒光強度取決于激發態的初始分布與熒光量子產率的大小。