儀器設備
1、 醫用微波爐;
2、 水浴鍋;
3、 OLYMPUS BX51熒光顯微鏡;
4、 OLYMPUS DP11數字顯微照相機。
FISH試劑
(1)1×PBS:由10×PBS溶液稀釋而成,儲存于4℃;
(2)20×SSC(pH7.0);
(3)2×SSC,由20×SSC溶液稀釋而成;
(4)25mg/ml蛋白酶K消化液。
(5)變性液(70%甲酰胺+2×SSC,pH7.0):4ml 20×SSC;8ml蒸餾水;28ml甲酰胺。每次新鮮配制。
(6)雜交后洗滌液: 20×SSC 4ml;蒸餾水16ml;甲酰胺20ml。每次新鮮配制。調節pH前升至室溫。
實驗步驟
1、脫蠟:
1)二甲苯脫蠟3次,每次5min;
2)100%酒精兩次,每次2min;
3)移出酒精,斜置切片,標記末段向下,空氣干燥。
2、蛋白酶處理:
1)每個染色缸40ml蛋白酶K消化溶液,配制方法如下:2×SSC 40ml倒人Facal管,在水浴槽中預熱。將消化酶液加入管內,搖動直到酶溶解。
2) 37℃水浴槽中預熱染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20min。
3) ×SSC在室溫下漂洗切片3次,每次1min。
4)梯度酒精脫水(-20℃預冷)。
3、變性: