藥用植物過氧化物酶同工酶分析及活性比較實驗

愈創木酚

聯苯胺    冰乙酸   乙酸鈉   硫酸錳   過氧化氫  TMEM   過硫酸銨  瓊脂

電泳儀    垂直板電泳槽     微量加樣器   燒杯  試管   長滴管    平皿

1.樣品液制備:取材料莖部1 g加兩倍冷純凈水，在冰箱預先冷卻的研缽中充分研成勻漿，然后離心（3500 r/ min，20 min），加等體積甘油和少許溴酚藍指示劑即可。
 
2.凝膠制備（按“常規聚丙烯酰胺凝膠電泳”），加樣量40μl/孔，電壓180 V，電泳時間2.5～3 h。
 
3.染色:0.5 g聯苯胺溶于250 ml 10%冰乙酸，配成聯苯胺母液。1.35 g愈創木酚溶于250 ml 10%冰乙酸，配成母液。染色液為100 ml 0.2mol/L乙酸鈉溶液，10 ml 5 mmol/L硫酸錳溶液，25 ml聯苯胺母液，40  ml愈創木酚母液，25 ml 0.12%過氧化氫溶液（臨用前配制）。凝膠洗出后轉移至染色液中，37 ℃恒溫下放置30 min，顯色后，置7%乙酸中保存，繪圖或照相。