蛋白質分子量的測定：SECMALS與傳統校正法（二）

表 1：BSA 單體、二聚體和三聚體的測得分子量

圖 4 顯示了傳統校正法的數據。 色譜圖顯示了碳酸酐酶（一種標準品）的折光率信號和生成的校正曲線。

圖 4：碳酸酐酶色譜圖與色譜柱校正曲線重疊。

采用傳統校正法測定 BSA 二聚體和三聚體的分子量，結果見表 2，可與表 1 中的 SECMALS數據進行比較。 由于這些寡聚體的結構不再像單體那樣是球狀的，因此使用色譜柱校正法無法準確計算它們的分子量。 不使用光散射的情況下，無法得知使用色譜柱校正法測得的分子量是否準確。 同樣地，這些峰可能被錯誤地鑒定為三聚體和五聚體。

但是，可通過精確地測定其分子量，使用光散射結果（表 1）正確地鑒定二聚體和三聚體。

表 2：使用色譜柱校正法測得的 BSA 寡聚體峰的分子量。

最后，使用 SEC-MALS 和色譜柱校正法測定了另一種蛋白質（胃蛋白酶）的分子量。色譜圖和光散射結果見圖 5。 表 3 顯示了測得分子量的比較結果。

圖 5：胃蛋白酶的色譜圖顯示 RI（紅色）和 SEC-MALS (90°)（桔色）檢測器信號。

表 3：通過傳統校正法和光散射技術測定的胃蛋白酶分子量

使用 SEC-MALS 正確測得胃蛋白酶的分子量為 35 kDa，而使用色譜柱校正法卻錯誤地測得分子量為 40 kDa。 造成這種結果的原因是胃蛋白酶的結構不是球狀，因此比預計為球狀蛋白質時的分子量大。 因此，它的洗脫時間較早，而且通過傳統校正法記錄的分子量比正確值略高。 另一方面，來自光散射的分子量不依賴于洗脫體積，因此可正確測量。

討論

此應用說明表明，使用 Malvern SEC-MALS 20 系統可成功測定一些蛋白質的分子量。將 MALS 添加至 SEC 系統可實現蛋白質分子量的測定，不依賴于蛋白質的洗脫體積或結構。 使用 SEC-MALS 系統可以正確測量胃蛋白酶和 BSA 寡聚體的分子量，從而實現良好的表征。