本法系依據蛋白質分子中含有的肽鍵在堿性溶液中與Cu2+螯合形成蛋白質-銅復合物，此復合物使酚試劑的磷鉬酸還原，產生藍色化合物，同時在堿性條件下酚試劑易被蛋白質中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸還原呈藍色反應。在一定范圍內其顏色深淺與蛋白質濃度呈正比，以蛋白質對照品溶液作標準曲線，采用比色法測定供試品中蛋白質的含量。
本法靈敏度高，測定范圍為20～250μg。但對本法產生干擾的物質較多，對雙縮脲反應產生干擾的離子，同樣容易干擾福林酚反應，且影響更大。如還原物質、酚類、枸櫞酸、硫酸銨、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。
除另有規定外，按方法1操作；如有干擾物質時，除另有規定外，按方法2操作并需經方法學驗證。
方法1：
試劑
堿性銅試液
取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30ml使溶解，將兩液混合作為乙液。臨用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。
對照品溶液的制備
除另有規定外，取血清白蛋白（牛）對照品或蛋白質含量測定國家標準品，加水溶解并制成每1ml中含0.2mg的溶液。
供試品溶液的制備
照各品種項下規定的方法制備（蛋白質濃度應與對照品溶液基本一致）。
測定法
精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml（對照品溶液取用量可在本法測定范圍內進行適當調整），分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林酚試液[取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1→16]4.0ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在650nm的波長處測定吸光度；同時以0號管作為空白。以對照品溶液濃度與其相對應的吸光度計算線性回歸方程。另精密量取供試品溶液適量，同法測定。從線性回歸方程計算供試品溶液中的蛋白質濃度，并乘以稀釋倍數，即得。
方法2：
測定前將脫氧膽酸鹽-三氯醋酸加入樣品中，通過將蛋白質沉淀來去除干擾物質。這種方法也可用于將稀溶液中的蛋白質濃集。
試劑
試液A
取1%氫氧化鈉溶液200ml與5%碳酸鈉溶液200ml混合，加水稀釋至500ml。
試液B
取2.98%二水合酒石酸二鈉溶液100ml與1.25%硫酸銅溶液100ml混合，加水稀釋至250ml，臨用新制。
試液C
取試液A與試液B按50：1的比例混合，臨用新制。
福林酚試液
取福林試液中的貯備液（2mol/L酸濃度）1→2（所配得的福林酚試液應滿足以下要求：取供試品溶液1ml，加試液C 5ml和配好的福林酚試液0.5ml，所得溶液的pH值應為10.3±0.3。若溶液pH值超出范圍，應適當調整福林酚試液的稀釋倍數）。
去氧膽酸鈉試液
取去氧膽酸鈉適量，加水制成每1ml中含1.5mg的溶液。
對照品溶液的制備
除另有規定外，取血清白蛋白（牛）對照品或蛋白質含量測定國家標準品適量，加水分別制成每1ml中含0.00mg、0.01mg、0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg的溶液（對照品溶液濃度可在本法測定范圍內進行適當調整）。
供試品溶液的制備
照各品種項下規定的方法制備（蛋白質濃度應與對照品溶液基本一致）。
測定法 精密量取各對照品溶液1.0ml，分別置玻璃試管中，加入去氧膽酸鈉試液0.1ml，渦旋混勻，室溫放置10分鐘，加入72%三氯醋酸溶液0.1ml，渦旋混勻，在3000g條件下離心30分鐘，輕輕倒出上清液，用吸管將剩余液體移除。蛋白質沉淀用試液C 1ml復溶后，再加入試液C 5ml，混勻，室溫放置10分鐘，加入福林酚試液0.5ml，立即混勻，室溫放置30分鐘，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在750nm的波長處測定吸光度；同時以0號管作為空白。以對照品溶液濃度與其相對應的吸光度計算線性回歸方程。另精密量取供試品溶液1.0ml，同法測定。從線性回歸方程計算供試品溶液中的蛋白質濃度，并乘以稀釋倍數，即得。