實驗材料、試劑、儀器耗材詳見「其他」。
1. 用鋒利的刀片小心地切去藍色吸頭領圈的部分，細的吸口端也裁去約 3 mm。
2. 用玻璃棒將一燒結的聚乙烯片從藍色吸頭的廣口端塞入，直到與吸頭內部緊密接合。 用直徑與聚乙烯片相同的玻璃棒有助于保持圓片的平直，即與吸頭的縱軸垂直。不要將圓片塞得 過深，因為這會導致吸頭脹大并破損。燒結圓片可以在吸頭截面上形成一個屏障以截留從平板上 刮下的纖維素。因此，圓片必須牢固地塞在吸頭中以抵抗來自真空管的吸力。
3. 測試圓片在吸頭中的擺放情況：在吸頭的廣口端連接一段管子，管子的另一端接在真空管上。使用較強的真空并用手指堵住吸頭的細口端，檢査確保燒結圓片固定 不動。
4. 將 TLC 平板，纖維素面朝上，放在光盒上。將放射自顯影膠片直接放在纖維素層上，仔細將平板上參照標記的位置與膠片上相應的圖像位置對齊。
5. 用黑色記號筆在 TLC 平板背面（玻璃面）畫出所要斑點的輪廓。
6. 拿掉膠片，將平板倒放在光盒里，用軟鉛筆在纖維素面描畫出前面記號的輪廓以便于在不用光盒的情況下能看到斑點的輪廓。
7. 將洗脫吸頭用一段管子連接到真空器上，開始抽真空。
8. 用洗脫吸頭的細口從 TLC 平板上刮下標記區域的纖維素，纖維素從板上刮下后會被吸入到吸頭中的濾片（燒結圓片）上。刮完后，拔下洗脫吸頭廣口端的管子，保持細口端朝上。
多個平板上相同的點可以用同一個吸頭刮取。但是，多次重復使用后，洗脫吸頭的細口端會變「鈍」，越來越難從平板上刮取纖維素。此時，可以用刀片在細口端再切去一段以重新修剪出鋒利 的邊緣。
9. 將洗脫吸頭放在一個 1.5 ml 的微量離心管中，廣口端朝下，燒結圓片帶有真空吸取的纖維素的一面朝上。
10. 立即加入 100 μl 電泳緩沖液，pH 1.9（洗脫緩沖液）到纖維素上，浸泡的同時從平板上真空吸取其他的斑點。
此處所用的洗脫緩沖液的 pH 應為1.9。如果 pH 1.9 的緩沖液不能洗脫下所有的磷酸肽，可以試 用去離子水。
11. 當所有的斑點都被真空吸取完并且最后吸取的斑點在緩沖液中已經浸泡了約 5 min 后，將微量離心管和吸頭等都放入離心機，全速離心約 3 s，關閉離心機。再加 100 μl 洗脫緩沖液到每個管子的纖維素上，并再次浸泡 5 min，然后離心過柱。重復洗脫 5 次，最終每管有 600 μl 洗脫液，內含 > 90% 的放射活性。
12. 取出微量離心管中的洗脫吸頭，小心使所有洗脫液保留在管中（有些會粘在吸頭邊緣形成液滴，應當將之移回管中）。保留洗脫吸頭。如果洗脫了不止一個斑點，標記好哪個吸頭用于哪個肽。
13. 全速離心 5 min 使洗脫液變澄清（離心后可以看見少量纖維素沉淀，沉淀多少取決于燒結圓片在洗脫吸頭內的接合緊密度）。將上清液轉移到新的微量離心管中。
14. 用契侖科夫計數法對洗脫液和空的洗脫吸頭進行測量。
好的洗脫吸頭應當保留并重復使用。清洗這些吸頭時，可以使用真空器連接到吸頭細口端吸出纖維素（到真空瓶中）并用約 10 ml 洗脫緩沖液或去離子水通過清洗吸頭。烘干并用閃爍計數器測量后可以再次使用。
15. 在 SpeedVac 蒸發器中凍干，用契侖科夫計數法進行計數。
最終洗脫下的肽樣品的 cpm 數決定其是否能用于下一步分析。
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