血栓與止血臨床檢驗的影響因素(3)

 三、抗凝劑與檢測試劑盒的影響

    （一）抗凝劑

    1、抗凝劑  常用抗凝劑有0.109mol/L枸椽酸鈉、26.86mmol/L EDTA-Na2和0.1mol/L草酸鈉等。應用這些常用抗凝劑對實驗結果有影響。用上述抗凝劑分別與血液嚴格按1:9抗凝，平行測定3次取其結果的均值，見表2。由表2所見，較理想的抗凝劑應首選枸椽酸鈉。因為因子V和因子VIII在枸椽酸鹽溶液中穩定性比在草酸鹽溶液中為好。研究表明，在標本采集后的15分鐘因子V活性就可降低。另外，采集于枸椽酸鹽溶液中的標本對肝素敏感性高于草酸鹽溶液的標本，這對于應用肝素的病人做APTT試驗作為實驗室監測就很重要。凝血試驗一般推薦的枸椽酸鈉抗凝劑的濃度是0.109mol/L或0.129mol/L（即3.2％的Na3C6H5O7·2H20溶液或3.8％Na3C6H5O7·5H2O溶液），抗凝劑與血液比例嚴格按1: 9。有研究表明，血細胞比容45％的病人，以抗凝劑與血液比例分別為1: 9和1: 5采血，其PT的結果分別為11.7秒和18.7秒，存在顯著差異。不應使用變質的枸椽酸鹽溶液，否則會使PT、APTT試驗的結果縮短。研究也表明，非緩沖枸椽酸鈉溶液pH若＞8.0，可破壞貯存標本的硅化試管的硅層，同時也破壞因子V和因子Ⅷ的活性，從而影響實驗結果，所以最佳pH條件為5.8。

    著重指出，血細胞比容（Hct）的高低能引起血漿與抗凝劑之間比例的變化。所以當Hct增高>55％或<25％時，務必用MacGann推薦的公式計算抗凝劑的用量，公式如下：抗凝劑的用量(m1)＝0.00185×全血量(m1)×［1-Hct（%）］。否則檢測結果不可信。叢玉隆等研究顯示，血細胞比容(Hct)增高的病人因抗凝劑含量過高可使PT、APTT結果延長；Hct減低的病人因抗凝劑含量過低可使PT、APTT結果縮短，結果見表3。 

表3不同Hct對PT、APTT測定結果的影響（單位：秒）    

        2、抗凝劑+抗聚劑  已證實，枸櫞酸鈉抗凝劑不能完全抑制血小板活化，活化血小板會釋放β-TG、PF4、vWF和PAI等，所以測定這些因子應選用抗凝劑+抗聚劑的抗凝劑。通常選用CTAD液［內含：枸櫞酸鈉0.11mol/L、茶堿（theophylline）l5mmol/L、腺苷(adenosine)3.7mmol/L和潘生丁(dipyridamol)0.198mmol/L]，其中腺苷作用是活化腺苷酸環化酶，增加血小板內環磷酸腺苷(c-AMP)濃度，減少體外血小板活化；茶堿和潘生丁通過抑制磷酸二酯酶的活性，在一定程度上能阻止c-AMP的降解；潘生丁還能阻止紅細胞攝入腺苷，從而有效的增加血小板腺苷應用量，活化腺苷酸環化酶，抑制血小板聚集和α顆粒內容物的釋放。CTAD抗凝的優點，采血后血小板很少活化，且保存時間可超過15小時，這很實用。

    3、抗凝劑+抗纖溶劑在溶栓治療的實驗室監測中，若用常用抗凝劑會使纖溶系統持續激活可致纖維蛋白原及其降解產物(FDP)的定量比現差異。應該使用“抗凝劑+抗纖溶劑”的抗凝劑，抗纖溶劑可選用抑肽酶，它可以抑制激肽釋放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血因子和纖溶活性，能精確的測定纖維蛋白原，但會引起凝血酶時間(TT)的延長。

    （二）檢測試劑  目前，商品化的凝血活酶和部分凝血活酶試劑的品種繁多。因各種凝血活酶試劑對因子Ⅶ的敏感性不同，故導致PT檢測的結果也不相同；同樣，活化部分凝血活酶試劑對因子Ⅷ、因子Ⅸ的敏感性不同，故導致APTT檢測的結果也不相同。因此，檢測試劑的選擇應掌握下列原則：

    1、根據試劑的重復性和敏感性，按照實驗操作方法的要求選擇合理的試劑。以APTT為例，APTT試驗通常以磷脂作為接觸表面，用白陶土、硅藻土或鞣花酸作為激活劑，這些激活劑對肝素、狼瘡抗凝物、因子Ⅷ和因子Ⅸ的敏感性各不相同，在檢測中就應根據不同的對象選擇合理的激活劑，結果見表4。

      表4不同激活劑對APTT的敏感性比較