(1) 樣本處理 ① 組織勻漿:稱取100-200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織,可用雙層紗布過濾。 ② 培養細胞勻漿:消化細胞,PBS洗滌,800 × g 5-10 min離心收集細胞。計數。每次提取需要5 × 107個細胞,加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞,再加入50ul Reagent A,將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內,0℃冰浴研磨細胞20-30次。 (2) 將組織或細胞勻漿物轉移到1.5ml離心管中,4℃,700× g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部,棄上清。加入0.5 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸沉淀; (3) 取另一新離心管內加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃, 700 × g 離心5min。將上清轉移到新離心管,細胞核沉淀在管底; (4) 棄上清,在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉,1000 × g 離心10min ,棄上清,得較純的細胞核沉淀; (5) 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸細胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。