二、TG測定的方法學
血清TG測定方法一般可分為化學法、酶法和色譜法3大類[6~9]。早期測定方法是以總脂質與膽固醇和磷脂之差估算。化學法用有機溶劑抽提標本中的TG, 去除抽提液中磷脂等干擾物后,用堿水解(皂化)TG,以過碘酸氧化甘油生成甲醛,然后用顯色反應測甲醛。比較準確的是二氯甲烷-硅酸-變色酸法(Van Handel-Caslson法),此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干擾、變色酸顯色靈敏度高、顯色穩定,至今還是美國疾病控制與預防中心(CDC)的內 部參考方法。但因操作步驟繁多、技術要求高而不適于常規工作應用。核素稀釋/氣相色譜/質譜技術(ID/GC/MS)主要用作參考系統中決定性方法的建立 及參考物質的制備與定值,此法費用昂貴,樣品處理復雜,難以推廣應用。(附
試劑組成 代號 種類 濃度 貯存2~8℃
R1 磷酸甘油氧化酶 ≥3.0KU/L 冷藏
(A液) 抗壞血酸氧化酶 ≥1.0KU/L
甘油激酶 ≥0.7KU/L
 4-氨基安替比林 80mg/L
R2 脂蛋白脂酶 ≥2.0KU/L 冷藏
過氧化物酶 ≥10KU/L
 ESPAS 300mg/L
R3(參考液) 甘油酸三脂 200mg/dl(2.26mmol/L) 冷藏
目前幾乎所有的臨床實驗室都用酶法檢測血清TG水平,雖然方法各異,但一般都包括3個基本步驟[3,5~7]:用最合適的LPL水解TG生成甘油和 FFA;接著是轉化,該步驟一般只用一種酶,例如甘油激酶,將甘油磷酸化以進行下一步反應,或者生成中間待測物;最后是有色染料(常為醌亞胺等)或者紫外 吸收物質的形成,再通過分光光度法計算相應的TG濃度。如脂蛋白脂肪酶-甘油磷酸氧化酶- 過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(GPO-PAP 法)等。此法具有簡便快速、微量、精密度高的優點,且特異性強,易于達到終點,線性范圍寬。用一步法測定的是血清總甘油酯(定義為TG和FG及少量甘油二 酯、甘油一酯之和,習慣統稱為TG)。為了消除FG的干擾,中華醫學會檢驗分會曾推薦GPO-PAP 法的兩步酶法作為血清TG常規測定方法[7],該法不增加試劑成本和工作量,適合自動化分析,由于試劑分成兩部分加入,對正確設置分析測定參數有較高要 求。對此法能否去凈游離甘油方面有人提出質疑。針對這一情況,近來中華醫學會檢驗分會在《關于臨床血脂測定的建議》文件中建議酶法如GPO-PAP 法作為臨床實驗室測定血清TG的常規方法。普通臨床常規實驗室可采用一步GPO-PAP法,有條件的實驗室(如三級以上醫院)應考慮開展游離甘油的測定 [1]。