注意事項
1、三硝基苯磺酸鈉(INBS)顯色法:
(1)標本在室溫或冰箱存放1周,酶活力無明顯變化,-15℃保存3周酶活性穩定。
(2)膽紅素對ACE有明顯抑制作用,故重度黃疸可使測定結果偏低。EDTA是ACE的強抑制劑,NaCl和Na2SO4對ACE有明顯的活化作用,溶血、脂血對結果無影響。
(3)本法與紫外分光光度法酶活力單位一致,但其測得值為紫外法的9倍。
2、酶偶聯法:
(1)當底物pH 8.0,GGCN 1.0mmol/L,GGT6.7ku/L時,ACE活性與吸光度值有良好線性。線性范圍大,即使ACE在1500U/L,不用稀釋也可獲得理想結果。
(2)GGCN濃度選擇:本反應體系中GGCN既是測定酶ACE的受體,又是指示酶GGT的供體。以1.0mmol/L的GGCN最理想,在此濃度下GGCN與吸光度保持良好的線性。
(3)GGT對測定的影響:本反應利用GGT將雙甘肽與GGCN偶聯,生成黃色的3-羧基-4-硝基苯胺,其加入量可直接影響測定結果。GGT高濃度可使底物過度消耗,使吸光度偏離曲線;低濃度GGT又使吸光度偏低,靈敏度不高。每次加入0.335 U GGT,可獲得理想吸光度與線性。在此濃度下,酶基質液的空白管吸光度<0.1A。
檢查過程
1、三硝基苯磺酸鈉(INBS)顯色法:取試管2支,標明空白管(B)和測定管(U),各加血清0.01ml,B管加試劑(1)、(3)、(4),U管加底物0.1ml,置37℃水浴30min;U管加試劑(3)、(4)各0.1ml,然后B、U管各加蒸餾水1.0ml,混勻;1500g離心10min,各取上清液0.75ml,分別加入試劑(2)1.0ml及TNBS 0.05ml,室溫30min或37℃ 15min,用5mm比色杯,在420nm處,B管調零,讀取U管吸光度。
2、酶偶聯法:取小試管4支,分別標明測定管(U),標準管(S),血清空白管(SB),試劑空白管(RB)。
混勻,以雙蒸餾水調零點,410nm波長比色,記錄各管2min吸光度△A值。