四、結果判讀
淋巴細胞亞群分析結果判讀，應對淋巴細胞亞群的相對計數和絕對計數分別進行判別。
(一)基本數據判斷
1．相對計數的3個基本公式：
FCM檢測淋巴細胞亞群結果應首先根據下述3個公式進行評估[15]。
公式1: CD3＋%＋CD19＋%＋CD16＋/CD56＋%＝100%±5%
公式2：CD4＋%＋CD8＋%＝CD3＋%±5%
公式3：CD4＋/CD8＋比值>1.0(1.5～2.0，新生兒期可達4.0)
2．相對計數基本公式意義：
(1) CD3＋%＋CD19＋%＋CD16＋/CD56＋%明顯大于或小于100%±5%，提示檢測系統異常或存在明顯淋巴細胞亞群異常。(2) CD4＋%＋CD8＋%之和明顯大于或小于CD3＋%±5%，提示存在雙陽性(CD4＋CD8＋)或雙陰性(CD4-CD8-)T淋巴細胞。(3)一般情況CD4＋/CD8＋比值>1，年齡越小CD4＋/CD8＋比值越大。CD4＋/CD8＋比值<1，提示T淋巴細胞亞群存在異常。
3.絕對計數的判斷：
絕對數標準不同儀器和年齡段及人群存在差別。個體間變化也比較大。各個實驗室所采用的標準有所不同。應根據實驗室的參考范圍進行評估。
(二)如何判斷淋巴細胞亞群中哪種或幾種細胞發生了變化
在淋巴細胞亞群結果判別中既要注意絕對計數的判別，也要判別相對計數也就是百分比的變化。淋巴細胞亞群發生變化可以是一種也可以是幾種同時發生變化。
根據基本公式1和2，一種淋巴細胞亞群絕對數的變化在檢測結果中不會影響到其他亞群絕對數變化，但可能引起自身相對計數和其他淋巴細胞亞群相對計數的變化。應注意判別。
1.一種淋巴細胞亞群變化：
(1)根據絕對計數判斷：
依據絕對計數參考值范圍進行判斷，若一種淋巴細胞亞群明顯高于參考值上限或低于參考值下限，其他亞群絕對計數基本正常，則可明確此群細胞存在異常。
(2)根據相對計數(百分比)進行判斷：
若沒有絕對計數報告，可根據相對百分比進行判斷。
二一判別法[15]：用于判別T、B、NK三群淋巴細胞亞群中哪一種是引起相對計數改變的原因。根據百分比，在三種淋巴細胞中，找出二種變化趨勢一致的，另一種則是異常的根源。
一二判別法[15]：用于判別T細胞兩個亞群中哪一種是引起相對計數變化的原因。
以CD3＋T細胞百分比變化為基準，兩種T細胞亞群CD4＋和CD8＋哪種百分比變化趨勢與CD3＋T細胞一致，這種T細胞亞群則是異常的根源。
可通過相同樣本血常規淋巴細胞計數換算出淋巴細胞亞群的絕對計數進行驗證。
2．兩種或以上淋巴細胞亞群變化：
此類情況不適合使用上述"二一判別法"和"一二判別法" 。
兩種或以上的淋巴細胞亞群發生變化，需要仔細甄別，這種情況也比較多見。一種情況是兩種淋巴細胞亞群同時發生變化，如聯合免疫缺陷病，T、B細胞都缺如；還有些是原發于一種淋巴細胞亞群的變化，其他淋巴細胞亞群因感染等因素，發生繼發性改變。
3.數據判別流程：
五、淋巴細胞亞群變化的特點和臨床價值
此部分內容很多情況使用"可能"、"也可能"等不確定詞匯，說明外周血T、B、NK細胞絕對計數和相對百分比變化程度較大。這種變化一方面來自于兒童隨年齡變化的特征，另一方面還受到許多環境、發育和疾病因素的綜合影響。因此，評估淋巴細胞亞群的變化不應是孤立的，應同時結合臨床與其他輔助檢查結果，對臨床價值做出判斷。淋巴細胞亞群的變化也很少與臨床疾病有一一對應的情況，這些變化與臨床疾病往往是一對多或多對一的。在本部分內容中，"典型案例"是屬于相對比較確定或常見的情況，其他可能出現的變化，臨床實際中也可能并不出現。使用本手冊時應將其作為重要的臨床輔助手段對待。熟練的應用還需要結合臨床疾病不斷地訓練和總結。
(一)單一淋巴細胞亞群變化
1.僅CD3＋T細胞增多：
CD3＋T%增高；根據基本公式1，CD19＋%和CD16＋/CD56＋%相對降低。例如：CD3＋T 5 000個/μl；其他淋巴細胞無變化；CD3＋T：90%；CD19＋：8%；CD16＋/CD56＋：1%。CD3＋T細胞增多又可分為如下：
(1) CD4＋細胞增多為主，CD4＋%增高；根據基本公式2，CD8＋%相對降低；CD4＋/CD8＋比值增高。例如：生理現象，生命早期CD4＋T細胞相對較多，比例較高；一些細菌感染可使CD4＋T細胞增多，比例增高；CD4＋/CD8＋比值也增高。鋅制劑可能使CD4＋增多[16]。
(2) CD8＋細胞增多為主，CD8＋%增高；根據基本公式2，CD4＋%相對降低；CD4＋/CD8＋比值降低。例如：EBV感染引起的傳染性單核細胞增多癥[17]；其他許多病毒感染、真菌感染及腫瘤等也可出現此類變化。
(3) CD4＋和CD8＋T細胞均增多，CD4＋%，CD8＋%無改變；CD4＋/CD8＋比值正常。
2.僅CD3＋T細胞減少：
CD3＋T%降低；根據基本公式1，CD19＋%和CD16＋/CD56＋%相對增高。例如：CD3＋T 500個/μl；其他淋巴細胞無變化；CD3＋T：10%；CD19＋：80%；CD16＋/CD56＋：10%。可分為如下：
(1) CD4＋細胞減少為主，CD4＋%降低；根據基本公式2，CD8＋%相對增高；CD4＋/CD8＋比值降低。例如：HIV感染[18]；先天性CD4＋T細胞缺陷[19]，特發性CD4＋T細胞減少癥[20]；因原發性或繼發性淋巴管擴張腹瀉可丟失CD4＋，CD4＋減少[21]。
(2) CD8＋細胞減少為主，CD8＋%降低；根據基本公式2，CD4＋%相對增高；CD4＋/CD8＋比值增高。例如：先天性CD8＋T細胞缺陷。
(3) CD4＋和CD8＋T細胞均減少，CD4＋%，CD8＋%無改變；CD4＋/CD8＋比值正常，也可因感染等因素改變。例如：先天性胸腺發育不良CD4＋T、CD8＋T細胞均減少[22]；細菌感染或一些病毒感染也可以造成暫時性CD4＋和CD8＋T細胞均減少；皮肌炎：CD4＋和CD8＋T細胞均減少[23]。
3.僅CD19＋B細胞增多：
CD19＋B%增高；根據基本公式1，CD3＋%和CD16＋/CD56＋%相對降低；CD4＋/CD8＋比值正常。
例如：CD19＋B 5 000個/μl；CD3＋T：45%；CD19＋：50%；CD16＋/CD56＋：5%。例如：一些淋巴瘤患者CD19＋B細胞增高明顯；一些細菌、病毒感染等可以使CD19＋B細胞暫時性增多，比例增高，程度相對較輕。
4．僅CD19＋B細胞減少：
CD19＋B%降低；根據基本公式1，CD3＋%和CD16＋/CD56＋%相對增高；CD4＋/CD8＋比值正常。
例如：CD19＋B：50個/μl；CD3＋T：85%；CD19＋：1%；CD16＋/CD56＋：14%。例如：原發性B細胞缺陷者[24]；部分EBV感染者，使用利妥昔單抗治療及部分白血病患者也可出現CD19＋B顯著減少[25]。
5．僅CD16＋/CD56＋NK細胞增多：
CD16＋/CD56＋NK%增高；根據基本公式1，CD3＋%和CD19＋%相對降低；CD4＋/CD8＋比值正常。
例如：CD16＋/CD56＋NK細胞5 000個/μl；CD3＋T：40%；CD19＋：10%；CD16＋/CD56＋：50%。例如：NK細胞淋巴瘤或白血病；病毒感染，化學毒物或藥物中毒也可能引起。
6.僅CD16＋/CD56＋NK細胞減少：
CD16＋/CD56＋NK%降低；根據基本公式1，CD19＋%和CD3＋T%相對增高；CD4＋/CD8＋比值正常。
例如：CD16＋/CD56＋NK細胞10個/μl；CD3＋T：80%；CD19＋：19%；CD16＋/CD56＋：1%。應注意，由于CD16＋/CD56＋NK細胞正常絕對計數較少，因此其減少對其他淋巴細胞亞群的相對計數影響常常并不明顯。可見于先天性NK細胞缺陷，但十分罕見。
(二)兩種淋巴細胞亞群變化
1. CD3＋T細胞和CD19＋B細胞增多：
CD3＋T細胞和CD19＋B%增高；根據基本公式1，CD16＋/CD56＋%相對降低。例如：CD3＋T細胞5 000個/μl；CD19＋B 3 000個/μl；CD3＋T：70%；CD19＋：29%；CD16＋/CD56＋：1%。注意：CD3＋T細胞增多也要參照上述"僅CD3＋T細胞增多"時判斷CD4＋和(或)CD8＋增多的情況進行進一步判斷。例如：部分EBV感染病例CD8＋反應性增高，CD19＋可因感染增高；化膿性細菌感染可使CD19＋B、CD4＋T細胞增多，因此CD3＋T細胞也增多；CD4＋/CD8＋比值增高。其他化學品(如苯[26])也可能引起類似改變。
2. CD3＋T細胞和CD19＋B細胞減少：
CD3＋T細胞和CD19＋B%降低；根據基本公式1，CD16＋/CD56＋%相對增高。例如：CD3＋T細胞100個/μl；CD19＋B 10個/μl；CD3＋T：10%；CD19＋：1%；CD16＋/CD56＋：89%。注意：CD3＋T細胞減少也要參照上述"僅CD3＋T細胞減少"時判斷CD4＋和(或)CD8＋減少的情況進一步判斷。例如：許多重癥聯合免疫缺陷病：CD3＋T和CD19＋B細胞明顯減少甚至可為0[27]；一些嚴重感染或炎癥可能使T、B細胞減少。身體耗竭(如重癥感染等)時也會出現類似現象，但一般不會完全缺如[28,29]。
3. CD3＋T細胞和CD16＋/CD56＋NK細胞增多：
CD3＋T細胞和CD16＋/CD56＋NK細胞增高；根據基本公式1，CD19＋%相對降低。注意：CD3＋T細胞增多也要參照上述"僅CD3＋T細胞增多"時判斷CD4＋和(或)CD8＋增多的情況進一步判斷。例如：部分病毒感染可致CD8＋T細胞和CD16＋/CD56＋增多；一些腫瘤性疾病、自身免疫性疾病、一些病原體感染也可能出現類似情況。
4. CD3＋T細胞和CD16＋/CD56＋NK細胞減少：
CD3＋T%和CD16＋/CD56＋%降低；根據基本公式1，CD19＋B%相對增高。注意：CD3＋T減少也要參照上述"僅CD3＋T細胞減少"時判斷CD4＋和(或)CD8＋減少的情況進一步判斷。例如：部分重癥聯合免疫缺陷病CD3＋T細胞和CD16＋/CD56＋可明顯低下[29]。
5. CD19＋B細胞和CD16＋/CD56＋NK細胞增多：
CD19＋B%和CD16＋/CD56＋ %增高；根據基本公式1，CD3＋T%相對降低少見，長期暴露于甲醛的工作者可能出現[30]；一些病毒感染，例如人乳頭瘤病毒感染可能引起這種改變。
6. CD19＋B細胞和CD16＋/CD56＋NK細胞減少：
CD19＋B%和CD16＋/CD56＋NK%降低；根據基本公式1，CD3＋T%相對增高。臨床這種情況罕見。
(三)3種淋巴細胞亞群變化
1. CD3＋T、CD19＋B和CD16＋/CD56＋NK細胞增多：
CD3＋T、CD19＋B%和CD16＋/CD56＋NK%可能都正常，CD4＋/CD8＋比值可增高、正常或降低。注意：這種情況若無絕對計數會造成誤判。如僅有相對計數時，可根據流式細胞術檢測時的血常規中淋巴細胞絕對計數判斷淋巴細胞是否增多。一些感染性疾病可能引起一過性的類似的改變，例如感染所致的類白血病反應。
2．CD3＋T、CD19＋B和CD16＋/CD56＋NK細胞減少：
CD3＋T細胞、CD19＋B%和CD16＋/CD56＋NK%可能都正常，CD4＋/CD8＋比值可增高、正常或降低。注意：這種情況若無絕對計數會造成誤判。如僅有相對計數時，可根據流式細胞術檢測時的血常規中淋巴細胞絕對計數判斷淋巴細胞是否減少。如：噬血細胞綜合征三系下降，各個淋巴細胞亞群也可能都減少；一些化學品如：三氯乙烯可使T、B、NK細胞均減少[31]。
臨床上除上述較為常見的淋巴細胞亞群變化特點外，還有其他更為復雜的變化情況，如也可存在一種細胞亞群絕對計數增多或減少，同時另兩種減少或增多的情況。
聲明：本共識旨在結合臨床已有經驗介紹FCM淋巴細胞亞群分析應用于臨床疾病的診斷、療效監測、預后評估等環節的方法。以指導臨床應用和結果判讀為主要目的，注重實用性和可操作性。而限于淋巴細胞亞群的影響因素眾多，以及當前研究相對較少，組織臨床、檢驗等領域專家制定本共識，不可避免帶有專家經驗。隨著醫學科學技術的發展，本共識將適時修訂，以適應醫學發展和臨床應用的需要。
編寫組成員：王曉川(復旦大學附屬兒科醫院臨床免疫科)，吳鳳岐(首都兒科研究所風濕免疫科)，趙曉東(重慶醫科大學附屬兒童醫院免疫科)，劉哲偉(首都兒科研究所)，農光民(廣西醫科大學附屬醫院兒科)，劉鋼(北京兒童醫院感染科)，黃文彥(上海交通大學附屬兒童醫院腎臟風濕科)，孫金嶠(復旦大學附屬兒科醫院臨床免疫科)，盛曉陽(上海交通大學附屬新華醫院兒童保健科)，沈立松(上海交通大學附屬新華醫院檢驗科)，崔巍(中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院檢驗科)，吳麗娟(成都軍區總醫院轉化醫學科)，婁加陶(上海交通大學附屬胸科醫院檢驗科)