質粒DNA導入細菌細胞實驗——一步法制備感受態細菌實驗

TSS

培養基平板

1.  準備新鮮的過夜菌。按1:100的比例將過夜培養的菌液加入到新鮮的LB培養液中，于37 °C培養至OD₆₀₀為0.3~0.4。

2.  加人等體積冰冷的2 X TSS于菌液中，在冰上溫和地混勻。

3.  可以將菌液分成小份用干冰/乙醇浴凍存，于-70 °C長期保存。用凍存感受態細菌進行轉化時，凍存菌要緩慢融化，并立即使用。

4.  為檢測感受態的效果，按照步驟將<10 ng的pBR322轉化到100 μl感受態細菌。按照CaCl₂轉化法的步驟8涂平板和計算轉化效率。

轉化效率大約為10⁷~10⁸轉化子/μg DNA。

5.  迅速融化凍存菌，將100 μl感受態細菌和1~5 μl DNA （0.1~100 ng）加入到一個冰冷的聚丙烯管或玻璃管中，4°C放置5~60 min。

6.  加入0.9 ml含20 mmol/L葡萄糖的LB培養液，37°C溫和振蕩培養30~60 min。

7.  在平板上挑選轉化體并保存。