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    發布時間:2019-04-08 22:27 原文鏈接: 超速離心法純化病毒實驗——密度梯度離心

    實驗方法原理病毒的密度與細胞碎片不同,用梯度制備儀制成適宜的介質梯度如蔗糖梯度或 CsCl 密度梯度,將病毒懸液加到密度梯度的上層,進行超速離心,離心管內病毒懸液中的病毒和細胞碎片隨其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯層中,吸出含有病毒的沉淀帶,即可得到相當純凈的病毒。
    實驗材料

    待純化的病毒

    試劑、試劑盒

    蔗糖梯度液或CsCl 密度梯度液

    儀器、耗材

    離心機

    實驗步驟


    (1) 根據病毒的密度選擇適宜的溶質,用梯度制備儀制成適宜的梯度介質,病毒的密度最好包括在梯度介質的中部或近介質底部 1/3 處。


    (2) 將欲純化的病毒懸液約 1 ml 小心鋪加于梯度介質,以 20 000g~40 000 g 離心 2~4 h離心速度和離心時間的選擇可根據病毒的大小而定,如流感病毒需 28 000 g,而如乙腦病毒則應40 000g 。


    (3) 病毒沉于介質的中部形成一明顯的沉淀帶,另有若干雜蛋白帶。小心吸出病毒并透析后,用生物學方法或電鏡檢查確定是否為病毒帶。


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