<血液標本的采集及準備
1. 輸血申請單：必須含有病人姓名、身份號、住院號、床號及負責醫師的簽名。還應包含申請日期、用血原因及時間、用血種類及數量；病人出生年月、性別、種族、疾病診斷、輸血史、妊娠史、輸血反應史、有無不規則抗體及血型等。
2. 受血者血樣：
① 認真核對后，方可采集；
② 血液標本必須收集到有正確標記的帶塞子的試管里，且標明病人姓名、住院號、采集日期及采集者；
③ 血液標本應是不抗凝血，以避免纖維蛋白、抗凝劑成分對血清學試驗的干擾；
④ 溶血或混入靜脈輸注液體而致標本稀釋的血液標本不得使用；
⑤ 須用輸血前3天以內采集的血液標本；
⑥ 輸血后，病人的血液標本須在1～4℃至少保存7天，以備重復試驗。
3. 獻血員血樣：
① 從血袋上附著的血樣小辮獲得獻血員血液標本；
② 在標本收集管上粘貼血袋上有關血液制品號的條形碼標簽；
③ 準確核對血袋上及標本管上的號碼。
血清學試驗
一、受血者試驗
（一）血型鑒定
1. ABO血型鑒定：
⑴ 常規鑒定：
① 正定型：用抗－A抗－B試劑檢測受血者紅細胞。
② 反定型：用A和B型試劑紅細胞檢測血清中的抗體。
人ABO血型是由紅細胞的抗原和血漿／血清中的抗體所決定，因此正反定型的結果應該一致。
表1 常規ABO正反定型試驗
| 正定型 | 反定型 | 血型 | ||
| 抗－A | 抗－B | A | B | |
| O | 0 | + | + | 0 |
| ＋ | 0 | 0 | + | A |
| 0 | ＋ | + | 0 | B |
| ＋ | ＋ | 0 | 0 | AB |
⑵ 如果正反定型不一致，則需進一步鑒定。可在正定型試驗中增加抗－A1、抗－AB及抗－H，反定型試驗中增加A2、O及自身紅細胞。
表2 疑難ABO正反定型試驗
| 正定型 | 反定型 | 自身對照 |
| 抗-A 抗-B 抗-AB 抗-A 抗-H | A1 A2 B O |
正定型試驗中的抗－AB是用來確認弱A和弱B抗原，抗－A1用于鑒定A亞型，抗－H用于鑒定亞型及孟買型。反定型試驗中的A2細胞是用于鑒定A2亞型。O細胞用于鑒定是否存在ABO系統以外的同種抗體影響定型，自身對照用于是否存在自身抗體影響定型，如果與O細胞或自身對照為陽性，則定型結果不可靠，必須進一步進行血型鑒定。
⑶ 如果無法找到正反定型不一致的原因，則只能給病人輸注O型紅細胞，病人血型可請血液中心血型參比試驗室協助鑒定。
⑷ ABO定型不一致的原因：
Ⅰ、反定型試驗出現弱反應或缺失抗體：
新生兒；
老人；
低球蛋白癥的白血病人或淋巴瘤病人（惡性）；
使用免疫抑制劑而致低球蛋白的病人；
先天丙球缺乏的病人；
免疫缺陷者；
骨髓移植病人；
雙胞胎嵌合體。
Ⅱ、弱反應或缺失抗原：
A亞型、B亞型或AB亞型；
白血病導致A或B抗原減弱，何杰金病有時會抑制抗原表達，與白血病類似；
某種疾病（如腹腔癌、胰腺癌）導致血漿中存在大量的型物質，中和抗－A或抗－B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性；洗滌紅細胞可解決此問題；
獲得性B；
抗－A或抗－B試劑中存在低頻抗原的抗體。
Ⅲ、蛋白或血漿不正常引起的正反定型不符：
某些疾病導致球蛋白水平增高引起緡錢狀凝集，纖維蛋白原水平的增高也會引起緡錢狀凝集，導致假陽性凝集；
血漿增溶劑（葡聚糖、PVP）也會引起緡錢狀凝集。
Ⅳ、其他原因引起的正反定型不符：
多凝集：當病人感染細菌或病毒后，病毒或細菌產生的酶使紅細胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗－T抗體，因此可與正常人血清產生凝集反應，正定型試驗假陽性；
冷自身抗體引起的自家凝集反應，正反定型均可出現假陽性；
存在ABO系統的意外抗體，如A2或A2B個體血清中可能存在天然抗－A1，導致反定型試驗多出抗體；
被檢者血清中存在ABO系統以外的同種抗體，反定型時出現假陽性反應；
非抗－A及抗－B的抗體與相應抗原形成復合體吸附在紅細胞表面，引起正定型非特異性凝集，如抗－B的染料吖啶黃。
2. Rh（D）血型鑒定：
⑴ Rh(D)抗原檢測原則：
① 對受血者常規一般只測Rh(D)抗原，而對獻血員不僅要檢查Rh(D)抗原，并在其為陰性的前提下必須進一步確定是否為弱Rh(D)（即D U）。
② Rh(D)陰性及弱D的受血者只能提供Rh(D)陰性血，不得使用D陽性及弱D的血。即弱D針對受血者而言為D陰性，而對于供血者而言則為D陽性。
③ 對直接抗人球蛋白試驗陽性的Rh(D)陰性紅細胞進行Rh(D)定型時，易引起假陽性反應，因此必須按照試劑生產商的試劑使用說明書要求，增加對照試驗。
⑵ Rh（D）抗原檢測方法：
① 試管法；
② 微柱凝膠法。
（二）、不規則抗體的檢測和鑒定：
1. 血型不規則抗體檢測：必須對有輸血史、妊娠史或短期內需要接受多次輸血者及交叉配血不合者進行抗體篩選試驗。
⑴ 抗體篩選的重要性：有利于早期發現和確認具有臨床意義的抗體，并可以在配血前鑒定此意外抗體，獲得充足的時間來選擇缺少相應抗原的相配合的血，避免由于尋找不到相合的血液而造成患者病情的延誤。
⑵ 抗體篩選用試劑紅細胞：
① 試劑紅細胞必須含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb
② 目前已商品化的試劑紅細胞有兩種，分別為雙人份細胞和三人份細胞組。
兩組細胞抗原分布圖
| Rh-Hr | Kell | Duffy | Kidd | Lewis | P | MN | Lutheran | Xg | ||
| donor | D C c E e | K k | Fya Fyb | Jka Jkb | Lea Leb | P1 | M N S s | Lua Lub | Xga | |
| Ⅰ | R1R1 | + + 0 0 + | + + | + 0 | ＋＋ | 0 + | 0 | + + ++ | 0 + | ＋ |
| Ⅱ | R2R2 | + 0 + + 0 | 0 + | ＋＋ | ＋0 | + 0 | ＋ | + 0 ++ | + + | 0 |
三組細胞抗原分布圖
| Rh-Hr | Kell | Duffy | Kidd | Lewis | P | MN | Lutheran | Xg | ||
| donor | D C c E e | K k | Fya Fyb | Jka Jkb | Lea Leb | P1 | MNSs | Lua Lub | Xga | |
| 1 | R1R1 | + + 0 0 + | + + | + 0 | 0 + | 0 + | ＋ | +++0 | 0 + | 0 |
| 2 | R2R2 | + 0 + + 0 | 0 + | + + | + + | + 0 | ＋ | 0+0+ | 0 + | + |
| 3 | rr | 0 0 + 0 + | 0 + | 0 + | + 0 | + 0 | ＋ | +00+ | 0 + | + |
③ 試劑紅細胞是保存在保存液中，一旦用生理鹽水或Liss液洗滌后則應該在24小時內使用，否則會因污染、抗原丟失導致試驗錯誤。