李煒煊 廣東省佛山市第一人民醫院（528000）
[摘要] 目的 對透射免疫比濁法定量測定血清D —二聚體的方法進行臨床實驗評價。方法 實驗評價包括精密度、線性測定、回收實驗以及干擾實驗。結果 該D-二聚體定量測定試劑在精密度測定CV%小于5%，回收率在95~99%。線性測定良好，可達16ug/ml，回歸方程為Y=1.0133X-0.0076，相關系數r=0.9997。對膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯均具有很好的抗干擾能力。結論 該試劑符合臨床使用的要求。
[關鍵詞] D-二聚體定量測定，精密度，線性，干擾
近幾年來，應用D-二聚體作為有癥狀的深層靜脈血栓（VTE）的診斷指標已得到廣泛的研究。[1]許多研究表明D-二聚體測定對于深層靜脈血栓（VTE）、微細血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病癥有高度的敏感性。而采用D-二聚體定量測定可以作為排除深層靜脈血栓（VTE）、微細血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）的第一步篩選。[2]
1 材料與方法
1.1 試劑：
1.1.1 D —二聚體透射免疫比濁法定量測定試劑，滴寶牌，批號021022。
1.1.2 D —二聚體定量測定試劑配套定標液，滴寶牌，批號021022。
1.1.3 D —二聚體定量測定試劑配套質控，滴寶牌，批號021022。以上試劑均由華鑫科技有限公司生產并提供。
1.2 使用儀器：OLYMPUS AU800
1.3 實驗方法：
1.3.1 精密度測定：
1.3.1.1 批內精密度測定：取高、低值質控，用上述D-二聚體定量測定試劑分別進行各20次測定。分別計算平均值（ ）、標準差（s）、變異系數（CV%）。
1.3.1.2 天間精密度測定：取高、低值質控，用上述D-二聚體定量測定試劑分別進行測試，連續測定20天，分別計算平均值（ ）、標準差（s）、變異系數（CV%）。
1.3.2 回收率實驗：取一個略較參考值高的非溶血、黃疸、脂濁血清標本進行測定十次，計算均值，然后在血清中添加已知不同濃度的標準物，添加濃度分別為(ug/ml) 0.00、5.00、10.00、15.00，再進行測定，最后計算回收率（Re%）。
1.3.3 線性測定：取一個高值標準物進行梯度稀釋，然后各濃度進行測定，將測定值與標準值進行線性回歸分析。
1.3.4 干擾實驗：按NCCLS EP7-P文件的要求，對D-二聚體定量測定試劑進行干擾實驗研究。用高、中、低三個濃度的血清標本，按濃度梯度分別添加膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯，測定各干擾物對結果的影響。
2 結果
2.1 精密度檢查
分別對高、低值質控血清進行測定，檢查試劑在高值和低值標本時的測定精密度。另外考慮到試劑穩定性的問題，也增加了天間變異的測定。實驗結果見表1。
表1 D-二聚體定量測定試劑的精密度檢查結果
低值質控血清1.2±0.4μg/ml | 高值質控血清 10.5±2.1μg/ml | |
批內測定均值（ ） | 1.10μg/ml | 12.14μg/ml |
批內標準差（s） | 0.04 | 0.10 |
批內變異系數（CV%） | 3.63 | 0.82 |
批間測定均值（ ） | 1.12μg/ml | 12.21μg/ml |
批間標準差（s） | 0.05 | 0.13 |
批間變異系數（CV%） | 4.46 | 1.06 |
該試劑在精密度方面完全符合臨床使用的要求，試劑在高、低值范圍內的重復性性能均表現良好，測定結果均在靶值范圍內。
2.2 回收率測定
該試劑在各濃度段的回收率均大于95%，平均為98.4%。非特異性結合的影響較少，使用上可合乎臨床上使用的要求。
2.3 線性測定
D-二聚體的正常參考值為5ug/ml，在深層靜脈血栓（VTE）病人中數值可達到10ug/ml以上。從實驗結果可見，該試劑的線性測定范圍可達到16ug/ml，線性良好（y = 1.0133x - 0.0076，r = 0.9997），完全滿足臨床的測定要求。線性測定結果見圖1。
2.4 干擾實驗
該D —二聚體定量測定試劑在膽紅素濃度為0~342umol/L，血紅蛋白濃度為0~500g/L，甘油三酯濃度為0~16.95mmol/L的干擾情況下，各濃度范圍的平均偏差均在6%內，為臨床上使用的可接受范圍。
3 討論
D —二聚體試劑盒按性質主要分有兩大類：定性與定量；按采用的方法學又分為乳膠法、ELISA法和免疫比濁法。乳膠法的試劑盒基本上是定性測試，它要求操作者根據乳膠凝集的情況來分別陰性與陽性標本。采用這種方法對一些臨界值標本往往難于判定，[3][4]由于要依賴操作者的判斷，所以準確性較其他方法低。ELISA法的敏感性較乳膠法的好，是測定D-二聚體的經典方法，但它存在操作費時、復雜，不適用于急診應用等缺點，即使現在有些廠家的試劑盒采用快速ELISA方法，但報告結果也要30分鐘以上，而用戶還要另外購買相關免疫測定機器，增加了操作成本。由于深層靜脈血栓（VTE）、微細血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病癥發病時間較短，通常在數小時內，所以一種快速簡便的D-二聚體定量測定方法，將大大有益于臨床對深層靜脈血栓（VTE）、微細血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病癥的診斷。[5]
該D-二聚體定量測定試劑采用透射免疫比濁法，其反應原理是采用極細的乳膠粒子包被D-二聚體抗體。當血清中含有D-二聚體時產生特異的抗原抗體反應，導致光產生散射效應，從而引起反應系統中吸光度的增加，由此定量測定出血清中D-二聚體的含量。該試劑盒可適用于各種生化分析儀，使用方便，操作簡單，在不增加儀器成本的基礎上，可實現定量測定，測試時間只需10分鐘，滿足了臨床急診需要，特別對深層靜脈血栓（VTE）、微細血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病癥的提前診斷意義更大，另外也可作為臨床溶栓治療的動態觀測指標。
綜合上述實驗分析結果，該試劑在臨床使用方面表現了良好的操作性能，特別是采用了免疫比濁法原理，使測定的特異性得到增強，在生化分析儀上可進行檢定，值得在各大中型醫院中推廣使用。
參考文獻
1 郭雪梅，王鴻利. 快速D-二聚體檢測在診斷靜脈血栓形成中的應用進展. 中國實驗診斷學，2000，4(1):41~3
2 Bounameaux H, Moerloose P, Reber G, et al. D-dimer testing in suspected venous thrombolism: an update. Q J Med 1997,90:437~42
3 Yu M, Nardella A, Pechet L. Screening tests of disseminated intravascular coagulation:guidelines for rapid and specific laboratory diagnosis. Crit Care Med 2000 28(6):1777~80
4 Michiels JJ, Pattynama PM. Exclusion and diagnosis of pulmonary embolism by a rapid ELISA D-dimer test and noninvasive imaging techniques within the context of a clinical model. Clin Appl Thromb Hemost 2000,6(1):46~52
5 Blackwell K. Haroon Z, Broadwater G,et al. Plasma D-dimer levels in operable breast cancer patients correlate with clinical stage and axillary lymph node status. J Clin Oncol 2000,18(3):600~8