實驗材料 酵母菌
試劑、試劑盒 TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇
儀器、耗材 離心管離心機搖床
實驗步驟
1. 酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期（OD600=1.0）。
2. 將培養液轉移到50 ml，離心管，于4℃，1 500 g 離心3 min。
3. 棄上清，菌體沉淀用1 ml 冰冷的水重懸，轉移至一個干凈的1.5 ml 微量離心管中， 4℃離心10 s，棄上清，繼續步驟4。需要時，將離心管置于干冰上速凍。
4. 用400 μl TSE溶液重懸細胞沉淀，加400 μl 酸性酚，激烈振蕩10 s，65℃溫育30~60 min，不時用旋渦振蕩器短暫振蕩。
5. 冰浴放置5 min，4℃高速離心5 min。
6. 水（上）相移到一個干凈的1.5 ml 微量離心管中，加400 μl 酸性酚，激烈振蕩，重復步驟5。
7. 將水相移到一個干凈的1.5 ml 微量離心管中，加入400 μl 氯仿，激烈振蕩，4℃高速離心5 min。
8. 將水相移到一個新管中，加40 μl 3mol/l 乙酸鈉，pH5.3及1 ml 冰冷的無水乙醇沉淀，4℃高速離心5 min，在冰冷的70%乙醇中快速振蕩以洗滌RNA沉淀。如上離心以沉淀RNA。
9. 沉淀用50 μl 水重溶，用分光光度法測A260及A280以確定濃度，于-70℃或-20℃貯存，可使用1年。
注意事項
不要用高濃度的細胞制備RNA，因為進入靜止期后，結果的一致性差，RNA產量不穩定。