47、水溶性非食用色素的快速檢測原理:
水溶性非食用色素與脫脂羊毛染色后不易去除的原理對部分水溶性非食用色素進行檢測。
48、味精谷氨酸鈉的快速檢測原理:
利用谷氨酸鈉的兩性作用,加入甲醛一固定谷氨酸鈉的堿性,使羥基顯示出酸性,用氫氧化鈉標準溶液滴定,以指示劑顯示為終點,得出樣品中谷氨酸鈉的含量。
49、黃曲霉毒素:
AF是一類化學結構類似的化合物,均為二氫呋喃環和香豆素的衍生物。目前已發現20多種。B1是最危險的致癌物 熒光特性 : 紫外線下 B1 B2 發藍色熒光G1G2發綠色熒光。
50、 黃曲霉毒素AF的快速檢測技術:
免疫親和柱-熒光分光光度計法和免疫親和柱-HPLC法
(1)分析原理:免疫親和柱試用大劑量的黃曲霉毒素的單克隆抗體固化在水不溶性的載體上,然后裝柱而成。試樣中AF用一定比例的甲醇/水提取,提取液經過過濾稀釋后,用免疫親和柱凈化,以甲醇將親和柱上的黃曲霉毒素林洗下來,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高測定靈敏度,然后用熒光分光光度計進行定量。也可以將甲醇-黃曲霉毒素淋洗液的一部分加入HPLC中,對黃曲霉毒素B1B2G1G2分別進行定量分析。
(2)ELISA法測定黃曲霉毒素B1 原理:將已知抗原吸附在固態載體表面,洗除未吸附抗原,加入一定量抗體與待測樣品提取液的混合液,競爭培養后,在固相載體表面形成抗原抗體復合物,洗除多于抗體成分,然后加入酶標記對抗球蛋白的第二抗體結合物,與吸附在固體表面的抗原抗體復合物結合,再加入酶的底物。在酶催化下底物降解,產生有色物質,通過酶標檢測儀測出酶底物的降解量。推出被測樣品中抗原量。
抗體:抗黃曲霉毒素B1的特異性單克隆抗體或抗血清 包被抗原:黃B1與載體蛋白結合物 酶標二抗:羊抗鼠IgG與辣根過氧化酶結合物 3.微柱篩選法:原理:樣品提取液通過由氧化鋁與硅鎂吸附劑組成的微柱層析管,雜質被氧化鋁吸附,黃曲霉毒素被硅鎂吸附劑吸附,在波長365nm紫外燈下顯示藍紫色熒光環,其熒光強度與黃曲霉毒素在一定的濃度范圍內成正比例關系.若硅鎂型吸附層未出現藍紫色熒光,則樣品為陰性(方法靈敏度為5~10ug/kg )。由于在微柱上不能分離黃曲霉毒素B1,B2,GI,G2,所以測得結果為總黃曲霉毒素含量。
1、 細菌毒素:
內毒素 外毒素 比較 :產生方式:內:細菌崩解后釋放 外:合成分泌到菌體外 化學成分:內:脂多糖LPS 外:蛋白質
52、間接凝集試驗定義:
將可溶性抗原或抗體吸附于一種與免疫無關的,適當大小的載體微利表面,再與相應抗體或可溶性抗原在適宜條件下相互作用 經一定時間后出現的肉眼可見的凝集現象。
53、食品中微生物快檢方法:
1)基于微生物代謝特征的檢測方法;
2)改良培養基法;
3)細菌直接計數法;
4)免疫學快速檢測技術
5)分子生物學快速檢測技術
6)自動化檢測技術
7)生物傳感器檢測技術。
54、ATP生物發光法 檢測原理:
熒光素+ATP+O2 (上:Mg2+)—→(下:熒光素酶)氧化型熒光素+AMP+PPI+H20
55、阻抗測定法原理:
當培養基中因微生物的代謝活動而發生化學改變時,阻抗也隨著改變。
56、溶氧——電流法檢測原理:
應用的是氧氣電極法的原理。在測量開始時 氧氣溶解在培養基中,隨著細菌的生長和繁殖,這些溶解氧不斷被消耗。DOX系統通過檢測與溶解氧量成比例的電流值來計算所含菌落總數,大腸菌群值。
57、微量量熱法:
是利用細菌生長時產生熱量的原理設計而成,微生物在生長和代謝的過程中,能產生大量的代謝熱。由于各種微生物的代謝產物熱效應不同,因此可顯示出特異性的熱效應曲線圖。在細菌生長過程中,用微量量熱計測量產熱量等熱數據,經過計算機處理,繪制出以產熱量對比時間組成的熱曲線圖,以此推斷細菌存在的數量。
58、放射測量法:
利用細菌在代謝碳水化合物時產生CO2的原理,把微量的放射性標記引入葡萄糖或者其他糖分子中。細菌生長時,糖被利用并放出標記的CO2,將生成的放射性CO2從培養裝置中導出,利用專用的測量儀來測定CO2量,放射量與細菌數成正比。
59、快速測試片法原理:
由上下兩層組成,上層的薄膜上通過粘合劑結合了指示劑,并涂覆了冷水可溶性凝膠,下層的紙片上涂覆了改良的培養基,并印有方格以便于計數。它是一種與限制備好的培養基系統,以每系統1ML的加樣量將樣品直接加到薄膜中間,蓋上含有膠凝劑和指示劑的覆蓋膜,培養后細菌在雙層膜之間生產,其代謝產物與顯色物質作用并顯色,即可直接計數。
60、顯色培養基:
是一類利用微生物只身代謝產生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來檢測微生物的新型培養基。這些相應的顯示底物是由產色基團和微生物部分可代謝物質組成,在特異性酶的作用下,游離出產色基團顯示一定顏色,直接觀察菌落顏色即可對菌種作出鑒定。優點:將菌株分離,鑒定結合在一起,無需對菌株進行分離純化和進一步生化鑒定,**節約樣品的分析檢測時間。
61、固相細胞計數spc原理:
可以在單個細胞水平對細菌進行快速檢測。用特殊濾膜濾過樣品后,存留在濾膜上的微生物用熒光素進行熒光染色,用落射熒光顯微鏡對每個螢光點進行直觀地檢測尤其對生長緩慢的微生物,檢測用時短,明顯優于傳統平板計數法。
62、流式細胞儀的基本原理:
A2待測細胞被致成單細胞懸液,經特異性熒光染料染色后加入樣品管中,在氣體壓力下進入流式細胞儀的流動室B 2流動室內充滿鞘液,鞘液和細胞懸液組成的細胞液注一起自流動室噴嘴口**出來,進入測量區,與水平方向的激光光束垂直相交。C2被熒光染料染色的cell受到激烈激光照射后熒光,同時產生散射光,熒光強度和被測cell中cell成分與熒光燃料的結合程度有關,散射光強度一般與cell大小成正比,D2將cell發出的熒光信號和散射光新號通過熒光光電倍增管接受,積分放大反轉化為電子信號輸入電子接收儀,通過計算機將數據計算出來。多參數分析實現cell的定量分析,估計微生物大小形狀和數量。
63、多聚酶鏈式反應PCR :
(1)PCR原理:在模板DNA、引物和4種脫氧單核苷酸存在的條件下依賴于耐高溫的DNA聚合酶的酶促合成反應。以欲擴增的DNA做為模板,以和模板正鏈和負鏈末端互補的兩種寡聚核苷酸做為引物,經過模板DNA變性、模板引物復性結合、并在DNA聚合酶作用下發生引物鏈延伸反應來合成新的模板DNA。模板DNA變性、引物結合(退火)、引物延伸合成DNA這三步構成一個PCR循環.每一循環的DNA產物經變性又成為下一個循環的模板DNA。這樣,目的的DNA的數量將以2年次方-2n的形式累積,在2小時內可擴增30(n)個循環,DNA量達原來的上百萬倍。
(2)PCR過程:1. 模板DNA的變性:模板DNA經加熱至95℃左右一定時間后,DNA雙鏈被解離為單鏈并游離于溶液中的過程;2. 模板DNA與引物的退火(復性):人工合成的一對引物在適合的溫度下(通常50-65℃)分別與模板DNA需要擴增區域的兩翼進行準確配對結合的過程;3. 引物的延伸:在適當的溫度下(通常70~75℃),以三磷酸脫氧核糖核苷(dNTP)為反應原料,DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,單鏈核苷酸從引物的3’末端摻入,沿靶序列模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。
重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板.每完成一個循環需2一4分鐘,在一個由計算機控制的循環加熱器上經過三十個循環,就可以把原來的樣品精確地擴增了2的30次方倍.PCR特點:快速,準確,安全檢測病原體。