食品微生物檢驗中無菌操作技術研究

　　摘要：食品微生物檢驗工作中，要對食品的采樣、取樣和檢驗等環節進行嚴格的無菌操作，保證食品檢驗數據的有效性，真實的反映食品的衛生質量情況。如果在檢驗中，某個環節出現失誤或者漏洞，那么食品檢驗工作就失去了真正的意義。所以，為了防止在檢驗中出現不規范操作的現象，對樣品造成污染，影響檢測結果的可靠性和真實性，需要在食品微生物檢驗中采用無菌檢驗的操作方法。 
　　一、 前言 
　　食品微生物檢測的主要內容包括：檢測食品中菌落的總數、致病菌、霉菌、大腸菌群以及酵母菌等繁殖的情況，通過檢測對食品的衛生情況進行評定，為食品生產的衛生性、安全性提供可靠的依據。在自然界中微生物廣泛的分布和存在，在食品中微生物主要依靠糖、脂肪、蛋白質等作為生存的條件，因此食品的微生物檢驗中，微生物檢驗的準確性很容易受到干擾。為確保食品微生物檢驗結果的準確性，檢驗人員需要在采樣、取樣以及檢驗等環節中進行無菌操作。 
　　二、 無菌操作中要注意的問題 
　　無菌操作主要是通過使用無菌器材，對植物組織、細胞傳代、細胞接種等進行培養操作，防止微生物進入到無菌的范圍內。微生物檢驗過程中，只有在檢測設備和培養菌無菌的情況下，才能保證檢驗樣品不受污染，同時保證食品微生物檢驗結果的準確性，可靠性。因此在一定程度上，可以將無菌操作理解為安全操作。但是在進無菌操作過程中要注意幾方面的問題。 
　　首先，在進行食品微生物無菌檢驗中，無菌操作的方法和過程，要嚴格根據食品微生物檢驗的相關規定和標準進行。針對一般的檢驗樣品，需要在干凈的區域內進行無菌檢驗，其中包括實驗室和工作臺等區域。而針對病原微生物分離的工作，檢驗人員必須要在二級生物實驗室內進行具體操作[1]。同時要確保實驗室內的環境衛生，并且要定期對室內的桌面、實驗臺面和墻壁等進行消毒處理。在使用實驗室之前，首先要用紫外線燈照射30分鐘左右，確保室內處于無菌狀態。除此之外，要定期對實驗室的沉降菌進行統計，檢查微生物生長繁殖的情況，盡量避免在無菌室內走動，嚴禁在無菌室內談笑。檢驗人員在進入無菌室前，要對雙手進行清潔，在緩沖室內更換好工作衣、帽、鞋等之后方可進入無菌室。 
　　其次，微生物檢驗中在打開樣品時，檢驗人員要注意與樣品保持距離，物品沒有經過消毒處理是不能接觸檢驗樣品的，盡量避免檢驗樣品暴露在空氣中，在拿取檢驗樣品時，要使用無菌工具。同時要注意，檢驗人員的手臂盡量不要放在檢驗樣品的上方，已經取出來的樣品禁止放回原處。檢驗操作過程中，檢驗人員的檢驗速度要盡量放慢，使用接種用具前和使用后，都要對接種用具進行灼燒滅菌[2]。 
　　最后，檢驗人員要注意在打開袋子或者瓶口前，使用酒精棉球對袋口或瓶口進行擦拭消毒。在進行液體培養物接種時，工作人員要保證菌液不能濺到其它器皿上或者工作臺上，如果不小心濺到，用及時用酒精棉球進行灼燒滅菌，然后用消毒液擦拭干凈。將帶有菌液的檢驗用具放入消毒液中進行消毒，對無菌物品要進行分類放置，同時要進行定期檢查。 
　　三、 無菌操作技術研究 
　　1.顯微鏡技術 
　　因為微生物用肉眼很難觀察到，所有需要借助顯微鏡技術進行觀察。在實驗室的微生物形態觀察中，比較常用的儀器是光學顯微鏡。染色、涂片等技術是使用顯微鏡技術中必不可少的的，但是無論是染色還是涂片，在操作過程中都要進行無菌操作，防止樣品收到雜菌的污染[3]。而玻片一旦受到污染，將會影響到檢驗結果的準確性和可靠性。因此，為了實現無菌的操作程序，首先要注意，在平板培養物的實驗室觀察中，盡量不要進行開蓋觀察，但是可以對檢驗結果進行開蓋檢查。例如，在進行培養移植或者涂片取樣時，可適度開縫但不能完全打開。其次，在涂片操作中，禁止用手直接接觸玻片，以此避免樣品被細菌感染。最后，對已經使用過的玻片進行消毒處理。 
　　2.無菌操作技術 
　　無菌操作技術包括：無菌環境、無菌器材和無菌操作。無菌環境主要是指在無菌室內進行試驗操作，對無菌室要進行合理布局，確保操作的安全性、方便性以及經濟性。無菌器材可分為器材滅菌和器材消毒，器材滅菌主要是指在檢驗過程中對使用的器材進行滅菌處理。無菌操作主要是指在檢驗過程中按照相關無菌操作標準和規定進行檢驗。 
　　3.純種分離技術 
　　進行食品微生物種群鑒定時，需要使用分離技術。要獲得某一種微生物的純培養物，可以根據這一微生物的特性，設計出與之匹配的培養條件和培養基，保證該微生物可以順利生長和繁殖。除此之外，還可以使用抑制其它微生物生長繁殖的方法，淘汰掉存在其中的雜菌。通過使用多種稀釋的方法，使單菌落在培養基上形成，為保證其屬于純培養，要對其進行分離、純化以及鑒定。在眾多的分離純化方法中，平板劃線分離法、稀釋混合倒平板法和稀釋涂布平板法是比較常用的分離純化方法，這三種方法不需要借助其他的設備進行造作，而且分離的效果較好。 
　　4.純種培養技術 
　　在食品微生物的無菌操作檢驗中，主要使用接種環接種的方法，即操作過程為從一個培養容器中到另外一個培養容器中。使用這種方法的主要原因是，環境中存在著較多的污染物，器皿一旦打開，環境中的污染物進入到器皿中，將會對器皿內的培養物或培養基造成污染。因此，在進行菌種移接操作時，必須在無菌環境中按照無菌操作的規定和要求進行。如果不能嚴格按照無菌操作規范要求進行，一旦檢驗對象受到污染，那么將會直接影響檢驗結果的準確性。所以，在純種培養中要盡量降低環境中的雜菌污染率，同時要對各項無菌操作技術進行熟練的掌握。 
　　5.空白對照 
　　空白對照方式是無菌操作檢驗的基本方式，指的是把營養瓊脂培養基傾人加有1mL空白稀釋液滅菌培養皿內作空白對照。該方式的檢驗結果可證實：首先，所使用的器皿是否經過徹底滅菌，器皿儲存是否合理。其次，無菌環境達到標準與否。最后，操作人員的無菌操作是否規范。通過空白對照的方式，能對上述問題進行直接檢驗，若發現操作不規范，可針對性找到問題所在，最終達到無菌操作要求。 
　　四、結束語 
　　因為微生物在自然界中廣泛的存在，所以在食品微生物檢驗過程中，檢驗人員一定要注重無菌操作，避免雜菌混入其中，影響檢驗結果。而在進行分離、接種等操作的時候，同樣要采用無菌操作技術。人工的無菌環境實際上并不是真正的無菌，只是相對而言的，絕對的無菌環境是不存在的。因此，食品微生物檢驗過程中，為了使其不受其它微生物的污染，無菌操作就顯得特別重要，所以要求檢驗人員對無菌操作程序和技術必須能夠熟練的掌握。 
　　參考文獻： 
　　[1].李成忠.食品微生物快速檢測技術研究[J].生物技術世界.2014，12（09）：99-145. 
　　[2].董樹奎.解析食品微生物檢驗[J].中小企業管理與科技（下旬刊）.2012，13（01）：136-156. 
　　[3].黃海蓮.食品微生物檢驗質量因素的探析[J].技術與市場.2011，10（09）：149-189.