摘 要 采用高速逆流色譜法分離純化秦艽地上部分中的龍膽苦苷。溶劑系統為V (氯仿) ∶V (甲醇) ∶V (水) =4∶4∶2, 上相為固定相,下相為流動相,轉速為800 r/min,流速為2 mL /min。所得產物經LC2MS分析為龍膽苦苷,純度經高效液相色譜分析為94. 0% (峰面積歸一化法) 。在保證分離效果的前提下,增大進樣量,摸索制備分離龍膽苦苷的高速逆流色譜條件,為用高速逆流色譜法大量制備龍膽苦苷提供了一個可行方法。
關鍵詞 高速逆流色譜法,龍膽苦苷,秦艽
秦艽為龍膽科植物大葉秦艽(Gen tiana m acrophylla Pall ) 、麻花秦艽(Gentiana stram inea M axim ) ,粗莖秦艽(Gentiana crassicaulis Du thie ex B u rk)和小秦艽(Gentiana dahurica Fisch)的總稱,是我國重要的傳統藥材。《神農本草經》列其為中品,“秦艽主寒熱邪氣,寒濕風痹肢節痛,下水,利小便。”[ 1 ]其主要成分龍膽苦苷有抗炎、鎮痛、保肝、利膽等作用[ 2 ] ,是在研中藥的一類新藥,需求量較大。目前,秦艽屬于瀕危藥材[ 3 ] ,資源匱乏,因此尋找其代替品及擴大用藥部位成了一個需要解決的問題。研究發現,龍膽苦苷不只存在于根中,地上部分亦含有大量龍膽苦苷[ 4 ] ,而傳統柱色譜法分離龍膽苦苷周期長,試劑消耗量大,所用固定相對樣品有不可逆性吸附作用,并且不容易提純。
高速逆流色譜不用任何固體支撐或載體,克服了傳統分離方法對樣品的不可逆性吸附作用的缺點,因而樣品回收率高。同時,還具有應用范圍廣、儀器操作簡單、分離量大等優點,因此被廣泛應用于天然產物的分離制備[ 5 ] 。
本實驗采用高速逆流色譜法,優化了分離龍膽苦苷的最佳溶劑體系,最終從秦艽地上部分粗提物中一次性分離得到純度94. 0%以上的龍膽苦苷150 mg,達到了制備分離的目的。