應用此種擴增方法，文庫不容易失真，這是由于在任何一步驟中，含有不同重組黏粒的混合菌群都不會在生長中發生競爭。但擴增過程冗長，而且有時由于主濾膜保存后菌落不再生長而丟失。本節還提供一種備選方法，即在 TB 平板上擴增。該備選擴增方案使那些生長不良的黏粒克隆易于丟失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | 應用此種擴增方法，文庫不容易失真，這是由于在任何一步驟中，含有不同重組黏粒的混合菌群都不會在生長中發生競爭。但擴增過程冗長，而且有時由于主濾膜保 存后菌落不再生長而丟失。本節還提供一種備選方法，即在 TB 平板上擴增。該備選擴增方案使那些生長不良的黏粒克隆易于丟失。 |
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| 實驗材料 | λ 噬菌體包裝反應大腸桿菌接種菌株 |
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| 儀器、耗材 | 卡那霉素 TB 瓊脂平板TB 培養基無去污劑、無菌的硝酸纖維素膜或尼龍濾膜 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 培養基
含 25 μg/ml 卡那霉素 TB 瓊脂平板（150 mm)
TB 培養基
2. 專用設備
無去污劑、無菌的硝酸纖維素膜或尼龍濾膜（137 mm）。
3. 載體和菌株
λ 噬菌體包裝反應
適宜的大腸桿菌接種菌株（如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)
二、方法
預培養
1. 計算能產生 3 萬~ 5 萬個轉化的菌落的包裝反應體積。
2. 取若干無菌試管，向每管中加入 0.2 ml 接種細菌，接著加入包裝反應液并使其達到步驟 1 確定的體積。
3. 將試管在 37℃ 溫育 20 min。
4. 各管中分別加入 0.5 ml TB, 繼續溫育 45 min。
在濾膜上擴增
5. 將標上編號的無菌濾膜鋪在數個含 25 μg/ml 卡那霉素的 150 mm TB 瓊脂平板上（濾膜數量與步驟 2 中試管數相同）。
6. 用無菌涂布棒將每支試管內容物涂在瓊脂平板上的濾膜表面。待接種物被濾膜吸收后，將平板移至 37℃ 溫箱放置數小時至過夜（12~15 h)。
7. 制作每個主濾膜的影印濾膜，-70℃ 保存。
8. 篩選文庫時，融化影印濾膜，裂解濾膜上的克隆，然后進行與標記探針的雜交。
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