實驗方法原理
Calcein
acetoxymethy1酯（Calcein-AM）是一種胞漿熒光標記物，本身無熒光，滲入細胞后細胞內酯酶催化生成的水溶性綠色熒光物質不易透出細胞。靶細胞用其標記后與效應細胞共育，再加Fluoro-Quench試劑（一種以Ca2+螯合的小牛血紅蛋白主要成分、還含溴化乙啶試劑，它對細胞無毒，不能進入活細胞但可能進入膜已破損的死細胞），淬滅培養液中的熒光，在板式熒光掃描儀上定量測定活細胞內的熒光強度，與靶細胞對照孔（代表細胞100%存活）比較。即可計算效應細胞殺傷靶細胞百分比。本法簡便可靠，無須收集和轉移培養上清，重復性高，變異性小，測定數據自動輸入計算機，適于大批量測定；可測CTL、LAK及NK細胞活性，還可在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下直接觀察細胞。
實驗步驟
1． 靶細胞的標記
用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進行標記。
2． 效-靶細胞作用
殺傷實驗在圓底96孔培養板中進行。按E/T比例：50/1、25/1、12.5/1、6.25/1、3.13/1、1.56/1加入梯度稀釋的效應細胞與標記好的靶細胞各l00μl/孔，每個比例3復孔。同時設自發釋放組3復孔，完全釋放組3復孔。效-靶細胞作用96孔培養板在37℃
5％ CO2培養箱孵育4h后，3000r/min離心5min，將上清移入新的孔中。
3． 熒光檢測
用熒光測量儀檢測上清的熒光值(FI)，激發光為485nm，發射光為538nm。
4． 結果計算
殺傷率(％)=■×100%