實驗材料 抗原
試劑、試劑盒 PBSPRMI1640培養基氯化銨
儀器、耗材 PVDF膜96孔板
實驗步驟
1. PBS 溶解抗原為30 μg/ml，加100 μl/孔于PVDF 膜鋪底的96 孔滅菌板過夜；
2. 第二天吸去包被液后，加5％FCS 的PRMI 1640 培養基100 μl 封閉1 小時，37℃；
3. 準備脾細胞懸液（用氯化銨去除紅細胞，制備成單個脾淋巴細胞懸液）；
4. 從1 × 106/孔開始，按1:3 的稀釋度開始逐孔稀釋做不同濃度梯度，并做3 個復孔，37 ℃靜置培養5 小時；
5. PBS 洗3～5 次，生物素化的抗鼠IgG 二抗孵育30 min；
6. PBS 洗3～5 次，鏈親和素標記的堿性磷酸酶孵育30 min；
7. PBS 洗3～5 次，用底物BCIP/NBT 顯色，顯微鏡下觀察顯色反應，顯色后及時終止反應；
8. 計數每孔中的斑點數目，計算每106 個脾細胞中抗體分泌細胞數量。