【摘要】目的： 探討熒光定量PCR檢測HBV DNA與HBVm的關系。 方法： 采用熒光定量PCR法和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）對159份HBVm 8種不同陽性模式及67份HBVm全陰模式血清進行HBV DNA檢測。 結果： HBsAg、HBcAb、HBeAe陽性者HBV DNA陽性率為8983%； HBsAg、HBcAb、HBeAb陽性者HBV DNA陽性率為2881%； HBsAb、HBcAb、HBeAb陽性者HBV DNA陽性率為1666%； HBVm全陰性者HBV DNA陽性率為1791%。 結論： 熒光定量PCR法檢測HBV DNA是乙型肝炎病毒復制最直接可信的指標，可反映HBV真實感染和復制狀態，特別是低復制狀態，明顯優于ELISA法檢測HBVm，具有重要臨床意義。
【關鍵詞】乙型肝炎病毒; 脫氧核糖核酸; 熒光定量聚合酶鏈反應; 血清標志物; 酶聯免疫吸附試驗
Comparative Analysis between HBV DNA by FQPCR and HBVm by ELISA
LIU Jinlu, LI Caiqing, LU Cheng, et al
The First Affiliated Hospital， Hebei North University, Zhangjiakou, 075000, Hebei China
【ABSTRACT】Objective: To investigate the relationship between HBVDNA determined by the polymerase chain reaction (PCR) assay and HepatitisB markers by ELISA method.Methods: The serum samples from 159 cases with 8 different positive models and 67 cases with all negative models were tested by Fluorescence quantitative PCR assay (FQPCR) and also by ELISA to compare the results.Results: Among the patients,the positive rate of HBVDNA for the patients with positive HBsAg、HBcAB and HBeAe was 8983%;the positive rate of HBVDNA for the patients with positive HBsAg、HBcAb and HBsAb was 2881%;the positive rate of HBVDNA for the patients with positive HBsAb、HBcAb and HBeAb was 1666%;the positive rate of HBV DNA for the patients with all negative HBVm was 1791%.Conclusione: HBVDNA determined by PCR assay is much more corrct and sensitive than HBVmarkers by ELISA assay.FQPCR could be used as a excellent monitor for the state of HBV irfection and its complication, especially for the state of low complication.
【KEY WORDS】HBV; DNA; FQPCR; HBVm; ELISA
HBV DNA 熒光定量檢測是目前診斷乙型肝炎、判斷病毒復制和評價患者肝臟病變、預后及藥物療效的重要指標之一，目前國內外已普遍應用于臨床。為進一步了解HBV DNA 檢測的實用價值及臨床意義，我們對226份血清標本，同時用ELISA 檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、及應用HBV DNA 熒光定量技術檢測HBV DNA，對檢測結果及臨床應用作出評價。
1材料和方法
11標本來源226份血清標本來自200412～20053月到感染科作乙型肝炎血清標志檢測者標本。所有標本均為隨機抽樣而未作任何選擇，在做乙型肝炎血清標志檢測同時，進行HBV DNA熒光定量檢測。
１2試劑與方法
１２１乙型肝炎血清標志檢測試劑均采用廈門新創科技有限公司提供的ELISA 藥盒，按說明書操作。
１２２HBV DNA 熒光定量檢測：藥盒由廣東中山迅達公司提供，按說明書操作。
２結果
226份血清標本的HBV DNA 及乙型肝炎血清標志物檢測結果如表1。2006年2月劉金祿等：HBV DNA與HBVm對比分析第1期2006年2月河北北方學院學報（醫學版）第1期表1226例乙型肝炎血清標志物及DNA檢測結果
ＨＢＶ血清標志物HBsAgHBsAbHBcAbHbeAgHbeAbHBV DNA總數陽性數陽性%copy/ml+-++-59538983*103-8+-+-+56172881*103-6+--+-215000103-6+-+--21115238103-6-++--734285103-5-+---623333103-++-+611666104-----67121791*103-4+----215000103合計〖6〗226482123注： *三組χ2檢驗：χ2=689,112＞χ2005（2）=599 ，P＜005。
３討論
HBV DNA與HBeAg密切相關， HBV DNA和HBeAg都是評價乙肝患者傳染性的重要指標。本文的檢測結果，8983% 的HBeAg陽性血清中檢出HBV DNA，符合以上觀點。略低于雷學忠、張春蘭的報道925%、9375%［1,2］。
從上述檢測結果可見，如果單憑HBeAg陽性或單憑 HBV DNA 陽性來判斷乙型肝炎患者的傳染性，將會漏掉10％左右具有傳染性乙型肝炎患者。因此我們認為應把HBeAg和 HBV DNA 結合起來，兩者只要有一項陽性就應考慮其具有傳染性。只有這樣才能把乙肝的預防、隔離及治療工作做徹底。
近來有文獻指出［3］：在部份HBsAg及HBeAb 陽性的乙肝患者血清中HBV DNA也陽性。因此認為，抗HBe陽性只能說明病毒復制程度減低，而不能代表復制停止，病情有可能反復。我們在56例小三陽的血清中有17例HBV DNA 陽性，陽性率2881％也反映以上觀點。與邱隆敏報道316%和雷學忠報道3235%近似［4］。所以我們認為在判斷乙型肝炎的預后，HBV DNA比HBeAg更敏感而特異。當乙肝病毒血清標志物檢測結果為HBeAg陰轉，而HBeAb陽轉還不能樂觀，只有在HBeAg與HBV DNA 同時陰轉時，病情才可能是較隱定的康復期。因此把HBV DNA列入常規檢查，將更能準確、更全面地判斷急慢性乙型肝炎的預后。
邱隆敏報道［4］HBsAb、HBcAb、HBeAb陽性者HBV DNA陽性率為20%，我們HBsAb、HBcAb、HBeAb陽性者HBV DNA陽性率為1666%。
從表1還可見：在67例全部陰性的血清中查出12例HBV DNA 陽性，陽性率1791％。明顯高于雷學忠667%報道［1］。ELISA檢測肝炎病毒是目前最常用方法之一，但影響因素頗多，如加樣時間，試劑平衡時間，樣本溶血程度等等。特別是低濃度樣本易導致假陰性結果，使弱陽性樣本漏檢。這對于篩選獻血者具有很大價值。因而我們認為在篩選獻血員時，最好能同時檢HBV DNA。
從表1中HBV DNA拷貝數量上看，大三陽明顯高于其它模式組，這對于乙肝藥物選擇及療效觀察具有極重要的意義。
綜上所述，乙型肝炎患者HBV熒光定量檢測是病毒復制最直接可信的指標，動態熒光定量PCR檢測HBV DNA對監測乙型肝炎感染的病情發展及抗HBV復制藥物的療效具有極重要的意義。對于HBVm全陰者， HBV DNA處于低拷貝意義有待進一步研究、探討。
參考文獻
1雷學忠，趙建勤，劉 麗，等.熒光定量檢測PCR HBV DNA與乙肝兩對半結果對比分析研究[J].四川醫學，2000，21（11）:949950
2張春蘭，謝敏，蔡曉莉，等.定量聚合酶鏈反應檢測肝病患者血清HBV DNA及治療意義[J].臨床肝膽病雜志，1999，15（3）:166169
3Chao HLY，Hussain M，LoK ASF.Different hepatitis B Virus genotypes are associated with different mutation in the cove promoter and precore regions during hepatitis B antigen seroconversion[J].Hepatology，1999，29:976984
4邱龍敏，羅亞文，吳亞麗，等.乙肝病毒DNA與血清免疫標志物的對比研究[J].遵義醫學院學報，1998，21（3）:1920