LSCM對被探測點所在焦面的逐點激發

SCM以激光為點光源，由照明針孔與探測針孔對被探測點的共軛關系，實現對被探測點所在焦面的逐點激發，逐點掃描，該技術稱為共聚焦。與普通熒光顯微鏡一次性照明整個視野不同，LSCM通過逐點掃描探測，呈現標本熒光層的2維或3維圖像，因此其對不同焦點和焦面的辨析能力，是普通熒光顯微鏡所不能達到的。其中，3D切片z軸步進間距（即焦面間距）為3μｍ，當前儀器上限25nm（儀器型號：Nikon A1）。在LSCM標本紋層成像過程中，放置于探測器前的探測針孔（Pinhole）起著關鍵作用，有效地阻擋了不同焦點帶來的雜散光，只有被探測點所發射的熒光透過Pinhole，到達探測器形成圖像，這對圖像對比度和分辨率有重要影響。而且LSCM采用光電倍增技術，可將微弱熒光信號進一步放大。綜上，利用LSCM可以真正地實現10μｍ級熒光紋層的清晰辨別，其分辨率和辨識度是普通熒光顯微鏡所不能實現的，在此基礎我們可以觀察并辨別10μｍ左右石筍“年紋層”和3~5μｍ級別硨磲“天紋層”