Nature：CRISPR就是這么好用！讓癌癥免疫療法“更有效”

　　短短幾年的時間，革命性基因編輯技術CRISPR已經在多個不同領域展現了它的實力。現在，將其用于改善人類疾病治療已成為很多人的期待。7月19日，一個美國科學家小組在Nature雜志發表了一項最新的研究成果。借助“魔剪”CRISPR，他們找到了能夠讓癌癥免疫療法更有效的新型藥物靶點。

　　這篇題為“In vivo CRISPR screening identifies Ptpn2 as a cancer immunotherapy target”的論文描述了科學家借助CRISPR-Cas9開發了一種新的篩選方法，可用于檢測小鼠中數以千計腫瘤基因的功能。利用這一篩選方法，研究小組找到了一個有望增強PD-1檢查點抑制劑（癌癥免疫療法的關鍵成員）有效性的新藥物靶點——Ptpn2。

　　刪除腫瘤細胞上的Ptpn2基因能夠使它們對PD-1檢查點抑制劑更敏感。這一研究的通訊作者、兒科腫瘤學家W. Nick Haining博士說：“PD-1檢查點抑制劑已經改變了多種癌癥的治療。然而，盡管這類癌癥免疫療法取得了臨床上的成功，但大多數患者并沒有獲益于PD-1阻斷療法。”

　　W. Nicholas Haining（圖片來源：Dana-Farber/Boston Children’s Cancer and Blood Disorders Center）

　　這一現狀促使很多團隊開始調查，是否能夠通過將其它藥物與PD-1抑制劑相聯合，以增加能夠響應這類療法的患者數量。Haining博士說：“目前，我們面臨的挑戰是，找到最有效的用于聯合治療的靶點。因此，我們著手開發能夠用于識別新藥靶（有助于機體免疫系統對抗癌癥的靶點）的更好的系統。”

　　基于“魔剪”CRISPR篩選數千個潛在靶點

　　研究中，論文第一作者Robert T. Manguso設計了一種基因篩選系統，用以鑒定被癌細胞用來躲避免疫攻擊的基因。他利用CRISPR-Cas9系統地敲除了由黑色素瘤皮膚癌細胞所表達的2,368個基因。這使得Manguso能夠鑒定出，當哪些基因被刪除后，癌細胞對PD-1阻斷療法更加敏感。

　　那么實驗是如何進行的呢？首先，研究人員工程改造了黑色素瘤皮膚癌細胞，使它們都攜帶Cas9酶（CRISPR編輯系統的一部分）；然后，利用一種病毒作為遞送載體，他們給每個細胞遞送了不同的“single guide RNA”（sgRNA）。聯合Cas9酶，sgRNA能夠使2,368個不同的基因被消除。

　　通過將腫瘤細胞注射到小鼠體內，然后用PD-1檢查點抑制劑治療這些小鼠，研究人員能夠記錄下哪些“修改后”的腫瘤細胞存活了下來。而那些死去的細胞由于它們失去了一些重要基因對PD-1阻斷療法變得敏感。

　　利用這一篩選途徑，科學家們首先證實了兩個已知的幫助癌細胞實現免疫逃逸的基因：PD-L1 和CD47。目前，FDA已經批準了3個PD-L1抗體上市。一些關于CD47抗體的臨床試驗已經在進行中。

　　隨后，研究人員發現了多種新的免疫逃逸基因，如果抑制它們，能夠增強PD-1免疫療法的療效。其中，Ptpn2是讓研究者們特別感興趣的一個。據Haining博士介紹，刪除Ptpn2會增強免疫信號通路，從而使腫瘤生長緩慢，在免疫攻擊下更容易死亡。