【操作】
1．RNA的提取見前。
2．變性膠的制備：取瓊脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加熱熔化，冷卻至 60℃時加入5×甲醛凝膠電泳緩沖溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混勻、制膠。待膠凝固后，置于1×甲醛凝膠電泳緩沖溶液中預電泳5min。
3．樣品制備 取總RNA4.5 ，加入5×甲醛凝膠電泳緩沖溶液4.0 、37%甲醛3.6 、甲酰胺10、于65℃溫浴15分鐘,水浴冷卻。加入上樣緩沖液2 。
4.電泳 上樣（約15～40 ），50V電泳（電泳約2小時）， 直至染色劑跑到凝膠邊緣為止。用已知相對分子質量的RNA作標準參照物,如用18s和28srRNA或者9s兔β珠蛋白的mRNA,這些RNA的長度分別為6333,2366和710個核苷酸。
5.電泳結束后,切下相對分子質量標準參照物的凝膠條, 浸入含溴乙啶的染色液中浸泡30～40分鐘,紫外燈下照相,測量每個RNA條帶到加樣孔的距離。以RNA片段大小的Ig值對RNA條帶的遷移距離作圖,以此計算雜交相對分子質量的大小。
6．將變性RNA轉移至硝酸纖維素濾膜
（1）將凝膠用刀片切割,切掉未用掉的凝膠邊緣區域,把含有變性RNA片斷的凝膠轉至玻璃平皿中。
（2）在一個大的玻璃皿中放置一個小玻璃皿或一疊玻璃作為平臺,上面放一張Whatman3MM濾紙,倒人20×SSC緩沖溶液使液面略低于平臺表面,當平臺上濾紙濕透后,用玻棒趕出所有氣泡。
（3）將 NC膜切割成與凝膠大小一致的一塊,用去離子水浸濕后轉入20×SSC緩沖液浸泡半小時。注意不能用手直接接觸NC膜。
（4）凝膠置于平臺上濕潤的3MM濾紙中央,濾紙和凝膠之間不能有氣泡。
（5）將NC膜放在凝膠上,小心不要使其再移動,趕出氣泡,做好記號。
（6）NC膜上覆蓋另一層Whatman 3MM濾紙(用20×SSC緩沖溶液預先浸濕)，再次趕出氣泡,依圖所示加上紙巾、玻板、重物,使NC膜上的RNA發生毛細轉移,轉移需6～18小時，紙巾濕后應更換新的紙巾。
（7）取下NC膜,浸入6×SSC緩沖溶液(由20×SSC緩沖溶液稀釋得到)中,5分鐘后取出晾干,放在兩層濾紙中間,于80℃真空爐中烘烤0.5～2小時。烘干的膜用塑料袋密封，4℃保存備用。
7．探針標記
(1) 取模板DNA25ng于0.5ml離心管中，95～100℃變性5min,冰浴5min。
(2) dNTPmix制備：取dGTP 1 、 dATP1 、dTTP1 混勻。
（3）將下列反應成分混合，加入上述微量離心管中：
dNTPmix ,BSA(10mg/ml) ,5×buffer , Klenow 酶 ,αdCTP
加入適量ddH2O使反應總體積為50 ，輕輕混勻。室溫下反應1h。
8. 預雜交 將膜的反面緊貼雜交瓶，加入預雜交液5ml，42℃預雜交3h。
9．雜交 將變性的探針（95～100℃變性5min,冰浴 5min）加入到預雜交液中，42℃雜交16h。
10．洗膜:傾去雜交液,2×SSC/0.1% SDS,室濕洗15min,0.2×SSC /0.1% SDS,55℃洗15min×2次。
11．壓片 將膜用雙蒸水漂洗片刻，用濾紙吸去膜上水分。用保鮮膜將尼龍膜包好，置于暗盒中，在暗室中壓上X光片。暗盒置-70℃放射自顯影7天左右。