Promega推出ADCC檢測新工具

　　抗體依賴性細胞介導的細胞毒性作用( ADCC )是抗體作用的一種機制， 病毒感染的細胞或其他病變細胞通過該機制被識別進而被細胞介導的免疫系統組分殺傷。Promega公司推出的ADCC Reporter Bioassay (ADCC 報告基因生物活性檢測試劑盒 ) 應用生物發光法，通過測量 NFAT 信號通路的活化，定量檢測治療性抗體 Fc 效應因子功能(圖 1 )。

　　圖1. ADCC bioassay 示意圖

　　試劑盒中包含“復蘇 - 即用”的效應細胞(以凍存形式提供)和檢測試劑。經過優化的操作方法使該檢測具有變異性低、準確度高的特點，并且，該生物活性檢測的全部操作可在一天內完成。這些特性使得 ADCC 報告基因檢測試劑盒適用于抗體藥物的研究，開發和產品的批簽發檢測( lot release )。試劑盒提供的“復蘇 - 即用”細胞在嚴格的質控下生產，可有效減少多次重復實驗間的變異性，并省去每次實驗前擴增和準備細胞的步驟。

　　ADCC 是利用抗體介導藥物殺傷靶癌細胞的理想機制。抗體與細胞表面上的目標抗原結合。如果抗體的 Fc 段同時結合到效應細胞(主要為自然殺傷細胞， natural killer cells )表面的 Fc γ RIIIa 受體上，兩種類型的細胞即發生多重交聯，導致 ADCC 作用機制通路的激活。 靶細胞的殺傷是此活化途徑的終點，這一指標被用在經典的 ADCC 生物活性檢測中，這些經典的檢測方法利用供者的外周血單核細胞( PBMC )或自然殺傷( NK )細胞亞群作為效應細胞。這些細胞的應答變異性很大，難于制備，并容易引起很高的背景讀數。

　　ADCC Reporter Bioassay 選擇了 ADCC 作用機制通路激活過程中較早的事件作為檢測的讀出指標：即效應細胞中由 NFAT (活化 T 細胞核因子)通路介導的基因轉錄的激活。此外， ADCC 報告基因檢測試劑盒使用工程改造的 Jurkat 細胞作為效應細胞，該細胞穩定表達了 Fc γ RIIIa 受體( V158 高親和力突變體)和由 NFAT 應答元件驅動表達的螢火蟲螢光素酶。 抗體在 ADCC 作用機制中的生物活性通過 NFAT 通路活化產生的螢光素酶定量，而效應細胞中的螢光素酶活性通過生物發光讀數定量。檢測的信號值高，且背景很低。

　　ADCC Reporter Bioassay 具有生物活性檢測所必需的明確的特異性。只有同時具備帶有正確表面抗原的靶細胞、正確的特異性抗體及表達 FcγRIIIa 的效應細胞時才會獲得良好的檢測應答，其中任一缺失都不能產生應答。

　　特點：

　　均質檢測，簡單方便：減少實驗組間變異性。

　　提供“復蘇 - 即用”形式的凍存細胞：無需繁瑣的細胞擴增培養操作。

　　生物發光法：靈敏，信噪比高。

　　基于 ADCC 作用機制研發：與已有 ADCC 細胞毒性檢測相關，并可替代已有檢測。

　　靈活：可調整至 384 孔板模式。

　　已使用 FDA- 批準的抗體進行驗證。

　　適用于藥品批簽發的質量控制：指示穩定性，卓越的線性度、準確度和精度。

　　應用：

　　? 驗證 ADCC 作用機制(或缺少該機制)。

　　? 辨別糖基化和 afucosylation 水平。

　　? 批簽發質量控制檢測 (QC lot release bioassay) 。

　　? 抗體篩選。