Westernblot的目的條帶較為彌散是怎么回事

目的蛋白質條帶模糊

1. 電泳凝膠濃度選擇不當。
2. 低于10Kd的小分子蛋白質要用Tricine膠。
3. 靠近前沿的電泳帶分辨率不佳。根據分子量與凝膠孔徑的關系，選擇適當濃度的凝膠。

4. 蛋白質樣品水解。注意除去蛋白質樣品的內源性的水解酶，不要反復凍融。

5. 電泳時間過長或過短。溴酚藍達到分離膠的底部即應該關閉電泳電源。

6. 緩沖溶液、SDS都要新鮮配制。

7. 避免加樣過多，提高分辨率。小體積樣品可給出窄帶，加樣體積根據樣品濃度和凝膠厚度靈活掌握。一般上樣體積為10-15uL。