HPLC分類及其原理
HPLC分類有很多種，可以根據不同的依據進行分類。1. 根據流動相和固定相的極性不同，HPLC可以分為正相色譜和反相色譜。正相高效液相色譜： 色譜柱中的固定相是由硅膠、氧化鋁等極性化合物組成。當色譜運行時，由于樣品中的極性化合物對固定相有較強的親和力，使它們在色譜柱中的保留時間比非極性化合物長，因此非極性化合物最先被洗脫出來。許多物質都可以用正相色譜法分析，但由于藥物、食物和其他生物制品大都是非極性的，所以在日常生活中應用不如反向色譜法廣泛。反相高效液相色譜 ：固定相由非極性化合物組成，如十八烷基硅烷、C18、C8等有機化合物。流動相是極性的。因此，極性高的化合物最先被洗脫，低極性或無極性的化合物最后洗脫。HPLC大都是對藥物、食品、生化分子等物質進行分析，而它們在自然界中都是極性物質（水溶性）。因此，反相高效液相色譜應用更為廣泛。2. 根據分離原理的不同，HPLC可分為以下六種。親和色譜： 主要利用樣品與固定性之間的親和性，實......閱讀全文
純水對于HPLC的影響
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ?HPLC）是一種有效可靠的技術，目前已成為許多實驗室研究的重要工具。HPLC最常見的一個問題就是溶劑中的污染物對分析結果的影響。顆粒顆粒可以損壞泵和注射器。顆粒也可以堵塞色譜柱并且熔化它，這會導致回壓增大
如何提高HPLC柱效？
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。?以下介紹了幾種國際上流行的測量和計算柱效值的方法。?1、提高液相色譜柱柱效的方法要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。?（1）降低移動相的流速,但會使分析時間延長。?（2）減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負載量也隨之減小。?（3）減小固定相的顆粒度,但不能
HPLC基礎知識（五）
4．與檢測器有關的故障及其排除1）流動池內有氣泡?? 如果有氣泡連續不斷地通過流動池，將使噪音增大，如果氣泡較大，則會在基線上出現許多線狀“峰”，這是由于系統內有氣泡，需要對流動相進行充分的除氣，檢查整個色譜系統是否漏氣，再加大流量驅除系統內的氣泡。如果氣泡停留在流動池內，也可能使噪音增大，可采
HPLC直接液體導入接口
直接液體導入接口（DLI）是將HPLC的流動相沿著進樣桿流動，然后通過一個直徑為3-5μm的針孔，使液體射入質譜計的CI離子源中。僅僅大約10-50μl/min的液流，就如小液滴流一樣可進入離子源（是傳統HPLC流量的1%-5%），否則質譜計的泵系統將被損傷。當它通過一個加熱的去溶劑區域時，溶劑蒸發
GC和HPLC的區別
Gas Chromatography 氣相色譜法氣相色譜系統由盛在管柱內的吸附劑(表1) 或惰性固體上涂著液體的固定相和不斷通過管柱的氣體的流動相組成。將欲分離、分析的樣品從管柱一端加入后，由于固定相對樣品中各組分吸附或溶解能力不同，即各組分在固定相和流動相之間的分配系數有差別，當組分在兩相中反復多
HPLC方法開法哪些事！
開發方法或方法驗證時最重要的一步就是流動相的選擇和比例的調整。我想大家肯定都遇到過分離度不好或峰形不好的情況，大部分原因就是流動相沒調好，那到底該怎么調，怎么選擇呢？看完下文可能你就知道答案了。 01、由強到弱 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗，這樣可以很快地得到分離
HPLC良好的連接方略
毛細管對高效液相色譜分離的影響 若高效液相色譜 (HPLC) 系統采用了不適當的連接方式或者應用不正確的毛細管，均可能導致均可能導致不良的峰擴寬，色譜柱的最佳分離效率就更無從談起。甚至還可能發生使用的柱子越細，其洗脫峰的擴寬反而越大的情況。本文將詳細介紹毛細管對高效液相色譜分離的影響，
Waters－HPLC故障排除指南
Waters公司的，HPLC故障排除指南1. Column Life-Time?2. Variable Retention Times???????3. Drifting Retention Times??4. Column-to-Column and Batch-to-Batch? Reprodu
HPLC峰變寬的原因
原因：a.在使用過程中柱本身退化，逐漸降低柱效; b.柱外峰寬效應。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統引起塔板數降低，說明新系統有很大的柱外峰寬效應; c.化學效應，多數是流動相和固定相相互作用所致，改變流動相可使寬峰有所改善。
HPLC如何計算樣品含量
你是用什么樣的定量方法呢？如果面積歸一化法的話就直接用你的待檢峰面積除上你的樣品所有峰面積和再乘100就是你的樣品中待檢成分的百分比濃度了。如果是內標或外標法應該要進標準溶液
HPLC基礎知識（一）
鑒于HPLC應用在藥品分析中越來越多，因此每一個藥品分析人員應該掌握并應用HPLC。I．概論???? 一、液相色譜理論發展簡況色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationaryphase)發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和
HPLC的故障及處理
（一) 保留時間變化1.柱溫變化?????? 柱恒溫2.等度與梯度間未能充分平衡?? 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱3.緩沖液容量不夠 用>25mmol/L的緩沖液4.柱污染???????? 每天沖洗柱5.柱內條件變化?? 穩定進樣條件,調節流動相6.柱快達到壽命?? 采用保護柱(二) 保留時間縮
HPLC基礎知識（四）
? 4．柱的使用和維護注意事項??? 色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。① 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內
HPLC與FPLC的異同
FPLC全稱為快速蛋白液相色譜（Fast protein liquid chromatography），其原理與GX液相色譜理論類似，是由經典的液體柱層析引入氣相色譜理論，并且對相體進行了改革，配用高壓輸液泵，采用高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和微機等發展起來的現代液相色譜。 近些年
水質對HPLC的影響
水質對HPLC的影響有機物超純水中的有機物可能影響色譜峰的分離度和積分、可能導致鬼峰、還可能改變固定相的選測性以及影響色譜基線。離子離子濃度的改變會影響分離結果，部分能吸收UV的離子會對峰產生影響。某些有腐蝕性離子的還會降低高壓輸液泵等配件的使用壽命。膠體膠體會不可逆的吸附在固定相上面，影響柱的分離
HPLC基礎知識（六）
三、流動相1．流動相的性質要求??? 一個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。??? 選好填料（固定相）后，強溶劑使溶質在填料表面的吸附減少，相應的容量因子k降低；而較弱的溶劑使溶質在填料表面吸附增加，相應的容量因子k升高。因此，k值是流動相組成的函數
HPLC流動相如何選擇
對于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流動相。甲醇/水作流動相時，如果得到的色譜圖出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出得峰太靠后而分離效果又不錯，可加大甲醇的比例，可使峰出的早一些。對于一些難分離的物質，要選用乙腈/水作流動相。
水質對HPLC的影響
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）是一種有效可靠的技術，目前已成為許多實驗室研究的重要工具。HPLC最常見的一個問題就是溶劑中的污染物對分析結果的影響。1、顆粒顆粒可以損壞泵和注射器。顆粒也可以堵塞色譜柱并且熔化它，這會導致回
HPLC基礎知識（三）
3．柱外效應速率理論研究的是柱內峰展寬因素，實際在柱外還存在引起峰展寬的因素，即柱外效應（色譜峰在柱外死空間里的擴展效應）。色譜峰展寬的總方差等于各方差之和，即：??? σ2＝σ2柱內＋σ2柱外＋σ2其它柱外效應主要由低劣的進樣技術、從進樣點到檢測池之間除柱子本身以外的所有死體積所引起。為了減少柱外
HPLC－故障及排除方法
詳細說明: 診狀 可能的原因 解 決 方 法 一 保留時間變化 1.柱溫變化 柱恒溫 2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 3.緩沖液容量不夠 用>25mmol/L的緩沖液 4.柱污染 每天沖洗柱 5.柱內條件變化 穩定進樣條件,調節流動相 6.柱快達到壽命 采
HPLC流動相如何選擇
對于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流動相。甲醇/水作流動相時，如果得到的色譜圖出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出得峰太靠后而分離效果又不錯，可加大甲醇的比例，可使峰出的早一些。對于一些難分離的物質，要選用乙腈/水作流動相。由于高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親和力，并參與固定相對
什么是HPLCUV
高效液相色譜HPLC紫外檢測器UV用紫外檢測器的高效液相色譜
HPLC流動相如何選擇
對于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流動相。甲醇/水作流動相時，如果得到的色譜圖出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出得峰太靠后而分離效果又不錯，可加大甲醇的比例，可使峰出的早一些。對于一些難分離的物質，要選用乙腈/水作流動相。由于高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親和力，并參與固定相對
HPLC的故障及處理
(一) 保留時間變化?1.柱溫變化 柱恒溫。?2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱。?3.緩沖液容量不夠 用>25mmol/L的緩沖液。?4.柱污染 每天沖洗柱。?5.柱內條件變化 穩定進樣條件，調節流動相。?6.柱快達到壽命 采用保護柱。?(二) 保留時間縮短?1.流速增
HPLC基礎知識（二）
3．離子交換色譜法 固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯形成的聚合物骨架，在表面未端芳環上接上羧基、磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子交換樹脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換，根據各離子與離子交換基團具有不同的
HPLC保留時間限制多少？
HPLC只是分離的手段，如果保留時間太短，說明被分離物質在固定相上面的保留較差，就有可能與不保留的雜質混在一起而干擾待測物的測定，當然，這只是在使用UV、ELSD等特異性不是很強的檢測器時的常見情況，但是如果使用熒光、質譜等特異性較強的檢測器時，這種干擾會被大大降低或者排除。保留時間與使用的液相色譜
基于溫度梯度的HPLC分析——溫度梯度淋洗的HPLC方法
在近年來所開發的一系列液相色譜方法中，溫度梯度淋洗方法有著獨特的應用，尤其是在要求以純水為流動相的色譜分析中。本文介紹了如何將已存在保留時間的模型發展成為溫度梯度淋洗的HPLC方法。 在高效液相色譜（HPLC）的方法開發中，原則上都是采用反復試驗法來建立的，實驗室用戶根據自己的經驗來改變一
HPLC基礎知識教程（七）
?幾種檢測器的主要性能全屏顯示表格UV熒光安培質譜蒸發光散射信號吸光度熒光強度電流離子流強度散射光強噪音10-510-310-9線性范圍105104105寬選擇性是是是否否流速影響無無有無溫度影響小小大小
HPLC日常操作注意事項
選擇流動相時應注意的幾個問題：盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。避免流動相與固定相發生作用而使柱效下降或損壞柱子。試樣在流動相中應有適宜的溶解度，防止產生沉淀并在柱中沉積。流動相同時還應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有較強的紫外吸收，一般