6.技術路線
mRNA 差異顯示技術
The fluoroDD System
?Builds on the HIEROGLYPH? system
–TMR-labeled anchored primers
–Increased primer concentrations
–Increased dNTP concentrations
–Optimized DD-PCR protocol
–TMR-labeled M.W. markers
Genomyx Research into Improving the Process of Differential Display
?Optimize gel electrophoresis
?Optimize PCR
?Optimize primers
?Streamline downstream analysis
HIEROGLYPH? mRNA Profile Kit Primers
Advantages of HIEROGLYPH? DD Primers
Genomyx LRS
genomyxSC and fluorescent labeling
Band Recovery with Virtual Grid and Excision Workstation
7. 差異顯示的優越性
?僅需少量的總RNA（0.2-0.02ug，200個 細胞中提取的總RNA）
?PCR放大作用，靈敏度高
? 同時分析多組樣品
?實驗周期短，8天可以完成
?最突出的優點是實驗過程中可步步驗證
–RNA提取
–RT-PCR
–切膠后再擴增
–克隆
–測序
–Northern驗證
–RT-PCR
8.存在的問題和對策
?假陽性率高（50-70%）
–提取RNA時，防止DNA的污染（DNA酶充分消化）
–切膠時選擇差異顯著的條帶，選擇或有或無的條帶
– 基因克隆時陽性菌落的挑選
–PCR擴增中交叉污染
–Reverse Northern確認
?擴增片段短
– 擴增片段較短（〈500bp），信息少
–RACE（Rapid Amplication of cDNA Ends)
–基因文庫得到 cDNA全長
9.醫學中的應用
?骨科
–Boden 發現LMP-1基因，并用于基因治療
?潰瘍性結腸炎
–Zuo 發現潰結黏膜25個表達基因
?腫瘤學研究方面
是一個重要的手段。
如胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、結腸癌等，并取得了令人鼓舞的研究進展。Samant等應用差異顯示技術克隆和鑒定新的乳腺癌轉移抑制基因（BRMS1），Chung等在小細胞肺癌中克隆出新的跨膜GTPase基因。在國內Chen等分離鑒定2個與食管癌相關的基因，SPRR3和Transglutaminase-3。
胃癌組織中，Yoshikawa等用差異顯示技術分離和鑒定了2個新的基因，與正常組織比較發現它們在人胃癌中下調。Shiozaki等報道一個新的胃特異性基因CA11，它在胃癌細胞中下調，通過基因文庫的鑒定
胃癌及癌前病變差異顯示研究