免疫熒光組織（細胞）化學染色方法

一、其它熒光抗體染色方法

1、膜抗原熒光抗體染色法

本法應用直接法或間接法的原理和步驟，可對活細胞在試管內進行染色，常用于T和B細胞、細胞培養物、瘤細胞抗原和受體等的檢查和研究，陽性熒光主要在細胞膜上。FACS即采用此法原理。

2、雙重染色法

在同一標本上有兩個抗原需要同時顯示（如A抗原和B抗原），A抗原的抗體用FITC標記，B抗原的抗體用羅達明標記，可采用以下染色方法：

（1）一步法雙染色　 先將兩種標記抗體按適當比例混合（A+B），按直接法進行染色。

（2）二步法雙染色 先用RB200標記的B抗體染色，不必洗去，再用FITC標記的A抗體染色，按間接法進行。

結果：A抗原陽性熒光呈現綠色，B抗原陽性呈現桔紅色熒光。

3、熒光抗體再染色法

若切片或其他標本經某種熒光抗體染色后，未獲得陽性結果，而又疑有另外的病原體存在時，可用相應的熒光抗體再染色。有時存檔蠟塊不能再用以切片，也可用存檔的HE染色標本，褪去蓋片和顏色，再作免疫熒光或其它免疫細胞化學的染色。

二、熒光抗原染色法

某些抗原可以用熒光素標記，制成熒光抗原，標記熒光素的方法與制備熒光抗體方法相同。用熒光抗原可以直接檢查細胞或組織內的相應抗體，特異性較好，敏感性較差。染色方法同熒光抗體染色的直接法。由于多數抗原難以提純或量少不昂貴，一般很少采用此法。