富集活細胞

細胞懸液 D-PBSA

Ficoll-Hypaque溶液或其他類似物

離心管或常規容器 生長培養基 注射器 移液管 細胞計數器 離心機

1. 讓懸液中大的組織團塊沉降。

2. 把 9 ml 的細胞懸液（細胞團盡量少）加在6 ml 的Ficoll （Ficoll/metrizoate 調至 1.077 g/ml）泛酸溶液上面，此步驟應在廣口、透明有蓋的離心管中進行，如 25 ml 無菌離心管或Nunclon 普通容器（清澈光亮的離心管或常規容器），或 Corning 50 ml 透明的塑料管，體積應兩倍于上述溶液的體積。

3. 400 g (在界面中間測量），離心15 min 。

4. 小心吸去上層液體勿破壞界面。

5. 用注射器（帶有鈍的插管或平針頭）或巴斯德吸管或移液器小心收集交界面液體。

6. 用培養基（如 DMEM/F12 , 含1 0 % 胎牛血清）將混合液稀釋至 20 ml。

7. 混合液以 70 g 離心 10 min。

8. 去除上清液，用 5 ml 生長培養基重懸細胞小團。

9 . 重復步驟 7 和 8 使細胞不含密度培養基。

10. 用血球計數板或電子計數儀計數細胞。

11. 接種至培養瓶中培養。

使用人的或其他靈長類的材料，不要用尖針或玻璃巴氏吸管。