結核桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）的特性和檢測方法（2）

五、結核桿菌毒力試驗——動物試驗法
【材料】
1. 動物：體重200~250克豚鼠2只
　　2. 結核桿菌培養物或結核病人檢驗材料（痰、尿、糞、腹水等材料經濃縮集菌）
　　3. 注射器及消毒用材料等。
【方法】
1. 選取結核菌素試驗為陰性的豚鼠兩只。
　　2. 吸取結核桿菌懸液或病人檢材，注入豚鼠腹股溝皮下0.1ml
　　3. 注射后每周定期檢查一次，觀察豚鼠腹股溝淋巴結是否腫大，局部變硬，化膿及體重減輕、體溫升高等癥狀。
　　4. 給豚鼠作結核菌素試驗，是否出現陽性結果。
　　5. 6周后，將豚鼠進行解剖，觀察淋巴結是否腫大，有無干酪性病變，肝、脾、肺等是否腫大，表面有無灰白色結節病灶，取可疑病灶進行涂片染色鏡檢和分離培養。若為陽性結果，可報告“動物接種后××天查到有結核菌感染”。如無癥狀及病變者，可報告為陰性。
六、結核桿菌濃縮集菌法（以處理痰標本為例）
【材料】
結核病人24小時痰液，細口瓶，0.02%酚紅液、汽油，NaOH，無菌生理鹽水等。
【方法】
(一)漂浮法：
1. 取24小時痰液15毫升，裝入細口瓶內，加入2倍量0.5%NaOH搖勻，高壓滅菌或煮沸20—30分鐘殺菌。
2. 待冷后加入汽油2毫升（二甲苯也可以），用力振蕩20—30分鐘，用生理鹽水加至液面與瓶口齊，靜置半小時。

3. 取瓶口表面油狀物涂于載物玻片上，微微加熱，干后再加，如此重復5—6次，至厚度適宜，烘干待冷，抗酸染色，油鏡頭檢查。
(二)沉淀法：
1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH，高壓無菌或煮沸20—30分鐘后，加入0.02%酚紅指示劑0.1毫升，劇烈振蕩混勻，亦可置37℃水浴消化30分鐘。
　　2. 矯正PH為7.0，3000轉/分離心30分鐘，棄去上清液。
　　3. 取沉淀物涂片染色鏡檢。若進行分離培養和動物接種，可免去高壓滅菌或煮沸的程序。
附錄：抗酸染液的配制
1. 石炭酸復紅液：稱取鹼性復紅4克，溶于95%酒精100毫升中成飽和液。再取飽和液10毫升與5%石炭酸溶液90毫升混勻即成。
　　2. 3%鹽酸酒精：取濃鹽酸3毫升，95%酒 97毫升混合。
　　3. 呂弗勒氏鹼性美蘭液：稱取美蘭2克，溶于95%酒精100毫升中，配成飽和液，取飽和液30毫升，再加入蒸餾水100毫升及10%氫氧化鉀水溶液0.1毫升即成。