研究報道首個病毒RdRP轉位中間體晶體結構
核酸聚合酶是核酸生物合成的分子機器,是實現核酸遺傳信息復制和傳遞的關鍵蛋白。在模板序列的指導下,聚合酶以NTP或dNTP為底物將單磷酸核苷(NMP)逐個添加到產物鏈上。每一次添加過程又稱核苷酸添加循環(nucleotide addition cycle或NAC),由底物結合并誘導活性中心關閉、磷酰基轉移反應以及聚合酶向模板下游轉位三個主要步驟構成,其分子機制是聚合酶領域的核心研究內容。 RNA病毒對人類健康構成嚴重威脅,超過三分之二的傳染性疾病由RNA病毒引起,這類病毒的基因組復制和基因轉錄由依賴RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase 或 RdRP)執行。前期研究表明,RdRP與DNA聚合酶、依賴DNA的RNA聚合酶、反轉錄酶等其他主要類型的聚合酶相比,在活性中心關閉和轉位這兩個關鍵步驟上具有鮮明的獨特性,解析其精確機制將對相關抗病毒研究提供重要依據。中國科學院武漢病毒研究所龔鵬研......閱讀全文
核酸擴增—普通聚合酶鏈反應
把DNA分子變性后解鏈,兩條單鏈DNA分別經復性與兩條引物互補結合,在4種dNTP存在和合適的條件下,由DNA聚合酶催化引物由5'到3'擴增延長,每經過變性、復性、延伸一個循環,模板DNA增加1倍,新合成的DNA鏈又可作為下一個循環的模板,經過30-50個循環,可使原DNA量增加
研究報道首個病毒RdRP轉位中間體晶體結構
核酸聚合酶是核酸生物合成的分子機器,是實現核酸遺傳信息復制和傳遞的關鍵蛋白。在模板序列的指導下,聚合酶以NTP或dNTP為底物將單磷酸核苷(NMP)逐個添加到產物鏈上。每一次添加過程又稱核苷酸添加循環(nucleotide addition cycle或NAC),由底物結合并誘導活性中心關閉、
關于RNA聚合酶的參與過程簡介
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸(NTP:ATP、GTP、CTP、UTP)作為RNA聚合酶的底物,DNA為模板,二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為:(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3',第一個核苷酸帶有3個磷酸基。
關于轉錄酶的參與過程介紹
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸(NTP:ATP、GTP、CTP、UTP)作為RNA聚合酶的底物,DNA為模板,二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為:(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3',第一個核苷酸帶有3個磷酸基。
RNA聚合酶的反應需要哪些底物?
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸(NTP:ATP、GTP、CTP、UTP)作為RNA聚合酶的底物,DNA為模板,二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為:(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3',第一個核苷酸帶有3個磷酸基。其后
RNA聚合酶的參與過程
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸(NTP:ATP、GTP、CTP、UTP)作為RNA聚合酶的底物,DNA為模板,二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為:(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3',第一個核苷酸帶有3個磷酸基。其后
進口-NMP-氣體檢測儀
它是直插式的檢測儀,也是理研唯一一款可在高溫環境下使用的固定式 NMP 氣體檢測儀,安裝簡單。可用于檢測 NMP(N-甲基-2-吡咯烷酮),其防爆檢定溫度范圍為0~+160℃。具有可檢測高沸點溶劑、200℃以上也可使用、能正確捕捉設備內中心部濃度、濃度顯示部與主體一體結構、操作簡單等特點。適用于對干
武漢病毒所獲得首個病毒RdRP轉位中間體晶體結構
核酸聚合酶是核酸生物合成的分子機器,是實現核酸遺傳信息復制和傳遞的關鍵蛋白。在模板序列的指導下,聚合酶以NTP或dNTP為底物將單磷酸核苷(NMP)逐個添加到產物鏈上。每一次添加過程又稱核苷酸添加循環(nucleotide addition cycle或NAC),由底物結合并誘導活性中心關閉、磷
關于基因擴增技術—聚合酶鏈反應的條件模板核酸的介紹
基因擴增技術—聚合酶鏈反應可以以DNA或RNA為模板進行核酸的體外擴增。不過RNA的擴增首先逆轉錄成cDNA后才能進行PCR循環。不同來源的核酸標本必須經處理后才能用于PCR的擴增,處理不當或處理過程中DNA掉失都會導致PCR擴增失敗。采集標本方法不當,未能獲得所要檢測的靶DNA都會導致出現假陰
我國學者發現調控核酸聚合酶催化復合物穩定性新機制
RNA病毒是一類獨特的生命形式,其轉錄及基因組復制過程均不涉及DNA形式,因此需要由病毒自身編碼的依賴RNA的RNA聚合酶(RdRP)來主導完成。和其他類別的持續合成聚合酶類似,病毒RdRP可準確而高效地實現多達數萬個核苷酸的合成,因此需要將催化復合物的穩定性維持在較高的水平。在DNA復制過程中
NMP處理鋰電池電解液的相關介紹
液態的電解液分散吸附于電極和隔膜的空隙中,因此,可選擇適當的溶劑[乙腈、N-甲基吡咯烷酮(NMP)]在50C時浸出,將固形物與溶劑分離后,通過減壓蒸餾回收循環利用溶劑,剩余的則是純電解質。減壓蒸餾的溶劑,沸點應低于電解質鋰鹽的分解溫度(約80C),并且應當是無水操作。按此種方法可以以經濟環保的手
《單一-NMP-氣體檢測儀:專注的守護精靈》
在一個充滿各類氣體的復雜世界里,有一種儀器宛如一位專注的精靈,默默守護著特定的領域,它就是單一 NMP 氣體檢測儀。?當我們提及氣體檢測,往往會想到那些能夠同時監測多種氣體的復雜設備。然而,單一 NMP 氣體檢測儀卻以其獨特的專注性,在眾多檢測儀器中獨樹一幟。?它的存在并非偶然,而是為了滿足那些對
NMPCS2混合溶劑萃取原煤產率分析
以徐州夾河煤(JHM)、河南平頂山煤(PDSM)、徐州龐莊煤(XZM)和山西介休煤(JXM)為原料,利用二硫化碳/氮甲基吡咯烷酮(CS2/NMP)混合溶劑和反萃取劑在溫和條件下將幾種煤全組分分離成萃余煤組分、瀝青質組分、精煤組分和輕質組分四大族組分,分析研究了各族組分的產率及總萃取率.結果表明,PD
《走進擴散式-NMP-氣體檢測儀的神秘世界》
在充滿科技與創新的現代社會,有一種小巧而強大的設備默默守護著我們的環境與安全,那就是擴散式 NMP 氣體檢測儀。?當我們提及 NMP 氣體,或許很多人會感到陌生。然而,在眾多的工業生產流程中,NMP 卻扮演著重要的角色。但與此同時,它也可能帶來潛在的危險。這時候,擴散式 NMP 氣體檢測儀就如同一位
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶;(2)依賴RNA的DNA聚合酶;(3)依賴DNA的RNA聚合酶;(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶,它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);D
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶;(2)依賴RNA的DNA聚合酶;(3)依賴DNA的RNA聚合酶;(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶,它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA
《高精度-NMP-氣體檢測儀:洞察入微的氣體偵探》
在那看似平靜的氣體世界里,隱藏著無數微小而關鍵的變化,而高精度 NMP 氣體檢測儀就如同一位目光銳利、洞察入微的偵探,不放過任何蛛絲馬跡。?當我們涉足化工工廠的繁忙車間、科研實驗室的靜謐角落,或是各類涉及 NMP 氣體的應用場景,都可能在不知不覺中與潛在的氣體威脅相遇。這時,高精度 NMP 氣體檢測
《TTL-型-NMP-氣體檢測儀:精準感知的科技精靈》
在科技的廣袤領域中,TTL 型 NMP 氣體檢測儀宛如一顆璀璨的星辰,散發著獨特而耀眼的光芒。它并非只是一件冰冷的儀器,而是一位敏銳而忠實的“守護者”,時刻準備為我們揭示 NMP 氣體的秘密。?當我們提及 TTL 型 NMP 氣體檢測儀,首先映入腦海的便是其卓越的精準檢測能力。它就像擁有一雙銳利的眼
核酸純化怎樣保存核酸
純化后的核酸,最后多使用水或者低濃度緩沖液溶解;其中 RNA 以水為主,DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解。經典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解,認為 EDTA 可以減少 DNA 被可能殘留下來的 DNase 降解的風險;如果操作過程控制得當,DNase 的殘留幾乎是可以忽
核酸純化怎樣保存核酸
純化后的核酸,最后多使用水或者低濃度緩沖液溶解;其中 RNA 以水為主,DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解。經典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解,認為 EDTA 可以減少 DNA 被可能殘留下來的 DNase 降解的風險;如果操作過程控制得當,DNase 的殘留幾乎是可以忽
核酸純化怎樣保存核酸
純化后的核酸,最后多使用水或者低濃度緩沖液溶解;其中 RNA 以水為主,DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解。經典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解,認為 EDTA 可以減少 DNA 被可能殘留下來的 DNase 降解的風險;如果操作過程控制得當,DNase 的殘留幾乎是可以忽
聚合酶鏈[式]反應
中文名稱聚合酶鏈[式]反應英文名稱polymerase chain reaction;PCR定 義通過DNA互補雙鏈解鏈、退火和聚合延伸的多次循環來擴增DNA特定序列的方法。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞生物學技術(二級學科)
反向聚合酶鏈反應
中文名稱反向聚合酶鏈反應英文名稱inverse PCR;iPCR定 義用于擴增已知序列的DNA旁側未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上沒有識別位點的限制內切酶,切出包含已知DNA、而兩端帶有未知序列的區段,將切出的DNA區段環化,然后再按已知的DNA序列設計一對引物進行擴增。應用學科細胞生物學
RNA聚合酶的特點
RNA聚合酶催化RNA的合成,其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點:①以DNA為模板;②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸;③聚合反應是核苷酸形成3’,5’一磷酸二酯鍵的反應;④以3’→5’方向閱讀模板,5’→3’方向合成核酸;⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
DNA聚合酶的特性
良好的熱穩定性;70℃ 2h,殘留90%活性;93℃ 2h,殘留60%活性;94℃ 2h,殘留40%活性。5'→3'聚合酶活性,對dATP有優先聚合活性;5'→3'外切酶活性;無3'→5'外切酶活性。
DNA聚合酶的用途
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶擴增的PCR產物,3'末端總是帶有1個非模板依賴型的突出堿基,而這個堿基幾乎總是A,因為Taq酶對dATP具有優先聚合活性,故可用T載體克隆。
聚合酶的分類介紹
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶;(2)依賴RNA的DNA聚合酶;(3)依賴DNA的RNA聚合酶;(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶,它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);D
RNA聚合酶的分類
通常可根據生物的類別,將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點,但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。(1)原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體(α2ββ'ωσ)分子量約500
DNA聚合酶的缺點
缺點無3'→5'閱讀校正功能,在PCR擴增過程可引起錯配,30次循環錯配率約0.25%。措施:選擇高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu擴增產物為平末端。
DNA聚合酶及其應用
(一)大腸桿菌DNA聚合酶I是Kornberg A. 1956年首先從大腸桿菌E。Coli 細胞中分離出來的。它是一種多功能性的酶,包括 3種不同的酶活力:5′→ 3′聚合酶活性(模板, 帶3′-OH游離基團的引物、4dNTPs、 Mg2+ )。雙鏈特異性的5'→3'核酸外切酶活性。