免疫組化的經驗總結（1）－常見問題
免疫組織化學的概念： 免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些？實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本最常用、最基本的方法，對于組織形態保存好，且能作連續切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中首選的組織標本制作方法。石蠟切片為什么要做抗原修復？有哪些方法？石蠟切片標本均用甲醛固定，使得細胞內抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間......閱讀全文
免疫組化的經驗總結（1）－常見問題
免疫組織化學的概念：?免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑?(熒光素、酶、金屬離子、同位素)?顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。免疫組化實驗所用的組織和細胞
6年免疫組化經驗總結
做過病理實驗的人都知道，實驗看似容易，但真想把它做好，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經驗。我從事病理實驗已有 6 年多了，在這段時間里，我做過許許多多病理相關實驗，剛開始啥也不懂，一味按照網上操作流程來做，但做的結果往往并不是十分理想，最終結果未能達到預期的效果。經過一段時間的
6年免疫組化經驗總結
做過病理實驗的人都知道，實驗看似容易，但真想把它做好，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經驗。我從事病理實驗已有 6 年多了，在這段時間里，我做過許許多多病理相關實驗，剛開始啥也不懂，一味按照網上操作流程來做，但做的結果往往并不是十分理想，最終結果未能達到預期的效果。經過一段時間的瀏覽和學習，在論
免疫組化的經驗總結（2）－操作規程
（一）、儀器設備????1）450px不銹鋼高壓鍋或電爐或醫用微波爐；?????2）水浴鍋（二）、試劑?????1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，?KH2PO4 1.4mmol/L。????2）0.0
免疫組化的經驗總結（3）－操作要點和技巧
1．??固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。?有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。?Bouin S固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強，固定
western－blot失敗經驗總結1
我做了很久的WB，最大的一個難點感覺在于樣品制備上！蛋白的降解有些時候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全沒事~~如果單獨做WB的話，感覺以“快速徹底裂解，先變性后保存”的原則比較有效，盡量選擇足夠強的裂解液，甚至直接給loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loadi
免疫組化常見問題的處理
?當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標本無染色??? ① 確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。????② 確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。????③ 對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以
免疫組化常見問題的處理
當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。 對照/標本無染色 ①確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ②確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。 ③對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗
免疫組化常見問題的處理
當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標本無染色①確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。③對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統是否和一抗匹配，
免疫組化常見問題的處理
當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。 對照/標本無染色 ①確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ②確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。 ③對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測
免疫組化常見問題的處理
當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標本無染色①????? 確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②????? 確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。③????? 對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體
免疫組化常見問題分析
1，石蠟切片在染色過程中出現脫片現象1）烤片時間不夠，或溫度不夠，可以延長烤片時間和提高烤片溫度；2）用含有多聚賴氨酸的玻片，可以購買到或這自己做；3）有些組織本身就容易掉片，如骨組織等，操作時沖PBS不要直接沖到組織上，沖到組織上方，讓它流下沖洗組織；4）用高溫修復時，溫度驟冷也可能引起。2，邊緣
IHC免疫組化常見問題分析
分析一下免疫組化實驗中一些常見的問題和解決措施： 常見問題一：所有切片呈陰性 原因分析：a.緩沖液內含疊氮化鈉，抑制酶的活性； b.染色未完全按照操作步驟進行； c.漏加一種抗體或抗體失活； d.復染或脫水劑使用不當； e.底物中加入的過氧化氫少或失活。
免疫組化常見問題及對策
免疫組織化學是應用抗原和抗體結合的原理，檢測細胞內多肽、蛋白質等大分子物質的分布。這種方法的特異性強、敏感度高、發展迅速、應用廣泛，成為生物學和醫學眾多學科的重要研究手段。做免疫組化可能遇到許多問題，大體歸納起來，主要有非特異性著色﹑著色部位不對﹑假陽性﹑無陽性﹑陽性弱五大類以及其他一些小問題。現在
免疫組化常見問題及對策
免疫組織化學是應用抗原和抗體結合的原理，檢測細胞內多肽、蛋白質等大分子物質的分布。這種方法的特異性強、敏感度高、發展迅速、應用廣泛，成為生物學和醫學眾多學科的重要研究手段。做免疫組化可能遇到許多問題，大體歸納起來，主要有非特異性著色﹑著色部位不對﹑假陽性﹑無陽性﹑陽性弱五大類以及其他一些小問題。
免疫組化技術要點與常見問題
在免疫組化過程中，為了更好的說明問題和查找原因，最好設置陽性對照片（已知的高表達相應抗原的組織）和陰性對照組織片（不加一抗但是加二抗系統/不加任何 抗體兩組），所有操作過程應完全一致。 染色弱或者沒有染色（按照先后順序，先排除一些簡單的原因）:
ELISA中常見問題及解決方法經驗總結
【摘要】：ELISA 試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。相關專題 ELISA免疫實驗技術 e
免疫組化常見問題及解決方法
當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標本無染色① 確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。③ 對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統是否和一抗
免疫組化常見問題及其解決辦法
1、 一抗從4度拿出后，為什么要進行37度復溫？（1）一方面，防止切片從4度直接放入PBS易脫片；（2）另一方面，使抗原抗體結合更穩定。一般不需要，但對表達較弱的抗原可能有用，4度和37度時分子運動方式不同，前者分子碰撞機率和運動速度小于后者，后者結合更快，但敏感性也提高了并易造成非特異染色。（3）
免疫組化基礎知識1
免疫組織化學的概念：?免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。?免疫組化實驗所用的抗體有哪些？?免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆
免疫組化技術規范1
歐美國家相繼開展了免疫組化質量控制工作，建立了一套比較完善的質量控制方法和程序。中國病理工作者委員會（CCP）免疫組化研究中心借鑒國外的先進經驗并結合我國當前的實際情況開始探索一種適合我國免疫組化質控的方法，同時，發現和推廣標準化的染色程序，改善和提高免疫組化實驗的可靠性，使免疫組化技術更具標準化，
PCR常見問題總（1）
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
免疫組化技術典型實驗案例學習1
案例一：DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景：奧運會期間我們課題組研究生都在實驗室做實驗，許多從北京購買的試劑買不到，對我們的許多實驗產生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒，效果不錯，在奧運會期間我準備做同批實驗分不同批次酶免疫組化實驗，第一批組化實驗結果很好，抗體濃度感覺比
細胞消化的經驗總結
一、酶消化法1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據細胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25% 的胰酶作用于單層貼壁的細胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活
PCR經驗總結（一）
(首先聲明，此文不如分子克隆第三版權威與分子克隆相背處，請信分子克隆)增加PCR的特異性1. primers design ?? 這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些條件a? 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同
PCR經驗總結（二）
5. touchdown PCR?? 原理很簡單,但的確是一個很有用的方法。舉個例子就OK, ANNEALING TEMP. 55度94 5min?? 94 30s?? 60 30s?? 72 1min 2cycles?? 94 30s?? 59 30s?? 72 1min 2cycles?? 94
細胞消化經驗總結！
一、酶消化法1、胰酶。這是用得多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據細胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存
有機合成操作的經驗總結
選擇玻璃儀器和攪拌子：（1）均相反應：物料不超過容器體積的2/3；（2）非均相、回流或者產生氣體的反應：物料不超過容器體積的小于1/2，無水無氧的反應時更應注意。攪拌裝置的選擇：（1）機械攪拌：物料體積>2 L的非均相體系；（2）強力攪拌：物料體積>3 L的均相反應和250 mL~2 L的非均相體系
尿沉渣檢驗的經驗總結
尿常規檢驗是明確患者是否患有泌尿系統疾病的常用方法。如果尿液沉渣檢驗的操作條件和程序不一致,即使是同一患者的同一尿液標本,亦可出現不同的檢驗結果,影響臨床診斷。為了探討尿液沉渣檢驗的常見影響因素,提高臨床診斷水平,我們對同一患者的尿液沉渣做了不同條件下的實驗測定。現報告如下。1．材料與方法1.1 標
手性柱的使用經驗總結
手性分離重要的是選擇一根好的手性柱，做手性分析的都知道，大賽璐的手性柱目前市場占有率高，根據用途分為多種不同的型號，大家熟悉的可能是OD-H。大賽璐公司初有四種填料，結構類似，對應的色譜柱分別是 OD、AD、OJ 和 AS，粒徑10um，后來填料粒徑變為5um，就是賣的多、使用范圍廣的柱子，號稱四大