電泳概述
電泳是在溶劑中通過電場轉移帶電分子,任何帶電的離子或者基團放置在電場中都將會遷移。除非在它們的等電點,大多數生物聚合物在任何pH值時都帶有凈電荷,它們將會以與電荷密度成比例的方式移動。分子在電場中的遷移取決于電場的強度、凈電荷、分子的大小和形狀、離子強度、粘度和分子移動介質的溫度。作為一種分析工具,電泳簡單、快速,并且具有高靈敏度。用來研究單一、帶電荷的分子的特性,也用來作為一種分離技術。支持基質最常用的支持介質是聚丙烯酰胺和瓊脂糖凝膠。它們作為多孔介質起作用,類似于一個篩子,延遲和阻礙大分子的運動,而允許小分子的自由地移動。過濾分子的范圍最終取決于膠孔大小和遷移分子大小的接近程度。瓊脂糖有一個相對較大的孔徑,用來分離大分子例如核酸、大蛋白和蛋白復合物,聚丙烯酰胺形成孔徑較小的膠,適合于分離大多數蛋白和小片段核酸。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE) 聚丙烯酰胺膠通過丙烯酰胺單體聚合成長鏈,同時通過雙功能化合物例如甲叉雙丙烯......閱讀全文
電泳概述
電泳是在溶劑中通過電場轉移帶電分子,任何帶電的離子或者基團放置在電場中都將會遷移。除非在它們的等電點,大多數生物聚合物在任何pH值時都帶有凈電荷,它們將會以與電荷密度成比例的方式移動。分子在電場中的遷移取決于電場的強度、凈電荷、分子的大小和形狀、離子強度、粘度和分子移動介質的溫度。作為一種分析工具,
電泳技術概述
電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發生遷移的過程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質、核苷酸、核酸等都具有可電離基團,它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電,在電場的作用下,這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動。電泳技術就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質以
電泳技術概述
電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發生遷移的過程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質、核苷酸、核酸等都具有可電離基團,它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電,在電場的作用下,這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動。電泳技術就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質以
凝膠電泳概述
以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大,對一般蛋白質不起分子篩作用,但適用于分離同工酶及其
電泳、轉膜概述
轉膜是把DNA 從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定,是進行各種后續研究(如 RFLP 分析,陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。實驗目的:掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟實驗原理:1.轉膜的方式:向上的毛細管轉移向下的毛細管轉移同時向兩張膜
電泳儀的概述
電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。而區帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及
尿液蛋白電泳的概述
尿蛋白電泳常用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE),亦稱蛋白SDS盤狀電泳。 SDS-PAGE是目前分析蛋白質亞基組成和測定其相對分子質量的最好方法。
血清蛋白電泳概述
鮮血清經電泳后可精確地描繪出患者蛋白質的全貌,有助于許多臨床疾病判斷的參考,在各類教材書上已清晰的描述了各種病理現象所顯現的圖像,一般常見的是白蛋白降低,某個球蛋白區域升高,提示不同的臨床意義。如球蛋白多克隆(poly-clonal)增高,β-γ融合的橋連現象,在γ區呈現細而密的寡克隆(oligoc
血清蛋白電泳概述
新鮮血清經電泳后可精確地描繪出患者蛋白質的全貌,有助于許多臨床疾病判斷的參考醫學教育|網,在各類教材書上已清晰的描述了各種病理現象所顯現的圖像,一般常見的是白蛋白降低,某個球蛋白區域升高,提示不同的臨床意義。如球蛋白多克隆(poly-clonal)增高,β-γ融合的橋連現象,在γ區呈現細而密的寡
雙向蛋白電泳儀概述
雙向蛋白電泳儀是一種用于生物學、基礎醫學、預防醫學與公共衛生學領域的分析儀器,于2006年2月20日啟用。 技術指標 最多可同時電泳12條IPG膠條(7-24厘米);1-d水平電泳最高電壓10000V;成像掃描儀分辨率600DPI。 主要功能 該系統包括第一向水平電泳、第二向垂直電泳和掃
關于免疫電泳的概述
免疫電泳(immune electrophoresis)是將瓊脂電泳和雙向瓊脂擴散結合起來,用于分析抗原組成的一種定性方法。由Grabar與Williams于1953年創立。此項技術由于既有抗原抗體反應的高度特異性,又有電泳分離技術的快速、靈敏和高分辨力,是廣泛應用于生物醫學領域的一項免疫學基本
免疫電泳法的概述
免疫電泳法是指利用凝膠電泳與雙向免疫擴散兩種技術結合的實驗方法。在電場作用下標本中各組分因電泳遷移率不同而分成區帶,然后沿電泳平行方向將凝膠挖一溝槽,將抗體加入溝槽內,使抗原與抗體相互擴散而形成沉淀線。根據沉淀線的數量、位置及形狀,以分析標本中所含組分的性質,本實驗常用于抗原分析及免疫性疾病的診
毛細管電泳概述
毛細管電泳(capillary electrophoresis, CE)又叫高效毛細管電泳(HPCE), 是近年來發展 快的分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs首先提出在75μm內徑毛細管柱內用高電壓進行分離, 創立了現代毛細管電泳。1984年Terabe等建立了膠束毛細管電動力
電泳緩沖液的概述
電泳緩沖液是核酸、蛋白質凝膠電泳系統的一個重要組成, 是電泳場中的導體,也是維持電泳系統恒定 pH值的必要條件。其成分及其離子強度影 響物質的電泳遷移率,應避免與被分離的樣 品發生化學反應而改變樣品的理化性質或使 其喪失生物活性。電泳緩沖液中的EDTA 可螯合Mg離子等二價陽離子,防止電泳時激
脈沖場凝膠電泳(PFGE)概述
脈沖場凝膠電泳(PFGE)的原理大致為:細菌包埋于瓊脂塊中,用適當的內切酶在原位對整個細菌染色體進行酶切,酶切片段在特定的電泳系統中通過電場方向不斷交替變換及合適的脈沖時間等條件下而得到良好的分離。PFGE中內切酶的選用至關重要,所采用的內切酶常為寡切點酶(low frequency cle
脈沖場凝膠電泳(PFGE)概述
脈沖場凝膠電泳(PFGE)的原理大致為:細菌包埋于瓊脂塊中,用適當的內切酶在原位對整個細菌染色體進行酶切,酶切片段在特定的電泳系統中通過電場方向不斷交替變換及合適的脈沖時間等條件下而得到良好的分離。PFGE中內切酶的選用至關重要,所采用的內切酶常為寡切點酶(lowfrequencycleavager
概述電泳儀的相關分類
根據電泳中是否使用支持介質分為自由電泳和區帶電泳。 自由電泳不使用支持介質,電泳在溶液中進行。這類電泳又分為非自由界面電泳和自由界面電泳兩類。非自由界面電泳指懸浮在溶液中的帶電粒子(如各種細胞)通電后全部移動,不出現界面,如顯微電泳等。自由界面電泳中被分離物質集中在某一層,形成各自的界面而進行
概述雙向凝膠電泳的技術應用
凝膠中蛋白的檢測 凝膠染色的目的是使其中的蛋白質能夠被觀察到。目前還沒有通用的染色方法,只能在考慮多種因素如需要的靈敏度、線性范圍、方便程度、費用、以及成像設備類型等基礎上,結合實際進行選擇。有時也可以將蛋白轉膜后通過免疫印跡的方法來進行檢測。 圖像采集和分析 成像設備可以攝人圖像,對凝膠
臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述
分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清蛋
臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述
分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清
關于免疫固定電泳技術的概述
免疫固定電泳技術是一種區帶電泳與免疫沉淀反應相結合的技術。基本原理是待測蛋白質在凝膠介質上經電泳分離后,將抗血清加上己分離的蛋白質泳道上或將已加抗血清的濾紙貼于其上。經孵育后,在適當位置產 生抗原抗體復合物并沉淀下來。 固定后的電泳凝膠在洗脫液中漂洗除去未結合的蛋白質,僅保留抗原抗體復合物,經
瓊脂糖凝膠電泳技術概述
一、瓊脂糖凝膠的特點天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,加之硫酸根可與
DNA酶切及凝膠電泳之一:概述
一. DNA的限制性內切酶酶切分析限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的DNA,而Ⅲ類酶
概述血免疫固定電泳的臨床意義
1.單克隆免疫球蛋白增殖病 以單一克隆的漿細胞過度增高為特征,常導致某種免疫球蛋白或免疫球蛋白亞單位大量合成而其他正常免疫球蛋白水平下降。IFE能夠確定這些蛋白質的單克隆屬性。 2.本周氏蛋白和游離輕鏈病 本周氏蛋白是沒有與免疫球蛋白分子中重鏈結合的單克隆κ或λ輕鏈。免疫固定電泳可確定本周
概述免疫電泳(M蛋白鑒定)的臨床意義
免疫電泳用于M蛋白血癥(如多發性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、輕鏈病、重鏈病等)的診斷與分型。M蛋白血癥可分為惡性與意義不明兩類。惡性M蛋白血癥主要包括多發性骨髓瘤(包括輕鏈病)、不完全骨髓瘤蛋白病(端基因缺陷)、重鏈病、巨球蛋白血癥、半分子病、7SIgM病等。意義不明M蛋白血癥又分為兩種,一種是良性蛋
聚丙烯酰胺凝膠電泳概述
聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成,聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過
毛細管電泳色譜儀毛細管概述
毛細管電泳色譜儀毛細管是電泳分離的關鍵。一、尺寸:毛細管尺寸的選擇與分離模式和樣品有關。自由溶液電泳多選用50或75μm內徑的毛細管,分離的有效長度常為40~100cm之間。如進行大顆粒如紅細胞分離,則需要內徑大于300mμm的毛細管。CGE和CEC的有效長度一般控制在20cm左右。二、涂層:毛細管
高效毛細管電泳儀檢測器概述
?????????高效毛細管電泳儀(HPCE)除了比高效液相色譜儀(HPLC)具有效率更高、速度更快、樣品和試劑耗量更少、應用面更廣等優點外,其儀器結構也比HPLC簡單。HPCE只需高壓直流電源、進樣裝置、毛細管和檢測器,前三個部件均易實現,困難之處在于檢測器,特別是光學類檢測器。由于HPCE溶質區
概述毛細管電泳儀的廣泛應用
CE具有多種分離模式(多種分離介質和原理),故具有多種功能,因此其應用十分廣泛,通常能配成溶液或懸浮溶液的樣品(除揮發性和不溶物外)均能用CE進行分離和分析,小到無機離子,大到生物大分子和超分子,甚至整個細胞都可進行分離檢測。它廣泛應用于生命科學、醫藥科學、臨床醫學、分子生物學、法庭與偵 破鑒定
固相pH梯度等電聚焦電泳色譜儀概述
固相pH梯度等電聚焦電泳色譜儀比載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳色譜儀具有更高的分辨率,更大的上樣量,其分辨率可達0.001pH,是目前分辨率zui高的電泳儀之一。一、工作原理:蛋白質分子按照自己的pI位置在固相pH梯度中遷移,達到自己的等電點時停止遷移。二、固相pH梯度的介質:固相pH梯度(IP