5.3NorthernBlot（二）
試劑、試劑盒20XMOPS 緩沖液20XSSC50XDenhardt 液雜交液10%SDS儀器、耗材水平電泳裝置水浴硝酸纖維素膜或尼龍膜3 MM 濾紙紫外交聯儀雜交管雜交爐[32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針實驗步驟一、材料與設備1) 水平電泳裝置2) 水浴3) 硝酸纖維素膜或尼龍膜4)3 MM 濾紙5) 紫外交聯儀6) 雜交管7) 雜交爐8）[32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針9)20XMOPS 緩沖液:4l.86 gMOPS,8 g 乙酸鈉，72 gEDTA，加 DEPC 水至 300 ml，調 pH 至 7.010)20XSSC(3mol/LNaCl，0.3mol/L 檸檬酸鈉，PH7.0):175 gNaCl,88 g 檸檬酸三鈉?2 H2O，加水 800 ml，用 l0mol/LNaOH 調 pH 至 7,0, 定容至 l000ml11）50XDenhardt 液：5 gFienll(type100),......閱讀全文
Northern雜交
轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗膜以去除非特異結合的探針，
Northern雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的
Northern雜交
實驗概要本實驗介紹了Northern雜交的基本流程。主要試劑液氮，TRIzol ?(Invitrogen)，DEPC水，氯仿，異丙醇，70%酒精，酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，水飽和酚(PH4.3)，無水乙醇，NaOAc，抽提緩沖液(0.02M ?NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern雜交技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。?含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，
Northern印跡和總RNA雜交實驗——Northern印跡分析
試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml? ???Milli-Q 或用玻璃器皿蒸餾過的
Northern雜交試驗指導手冊（6）－Northern－印跡雜交
A． 探針準備DIG標記的RNA探針與DNA探針相比，顯示較強的雜交信號和較地的非特異性背景，因此，只要可能選用RNA探針可以比DNA探針獲得更好的雜交結果。如果必須使用DNA探針，建議使用高SDS雜交緩沖液或DIG Easy Hyb以減少背景。在正式雜交試驗之前，優化雜交探針濃度是避免顏色背景所必
OsAGAP的Northern雜交
實驗概要本實驗參照Sambrook等(1989)的方法進行轉膜，雜交。實驗步驟1. RNA樣品的電泳轉膜將適量的瓊脂糖溶于水，微波爐加熱使之完全溶解，并冷卻至60℃；將甲醛溶液、瓊脂糖水溶液、5X甲醛凝膠電泳緩沖液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝膠。將不同材料的上樣量調成一致，均為35ug，與樣
Northern－blotting操作步驟
1. 取RNA2. 將電泳槽和板，梳齒浸泡在3%H2O2中20-30分鐘，并吹干3. 跑 1%瓊脂糖凝膠，檢測樣本RNA含量4. 變性膠在桌面上利用保險膜鋪出一塊干凈的區域，將1.95g 瓊脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加熱前可在三角瓶上做一個記號，在加熱后把蒸發的水分補足）加熱
Northern－印跡分析實驗
為了確認所選擇 cDNA 確實是差異表達的，建議使用 Northern 印跡分析，而不要用其他的確認技術，比如反向 Northern 雜交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲
Northern－印跡分析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 菌落裂解緩沖液 蒸餾水 甲醛 甲酰胺預雜交 雜交液 HotPrime cDNA Labeling Kit
Northern－印跡分析實驗
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲醛甲酰胺預雜交 雜交液HotPrime cDNA Labeling Kit礦物油MOPS 緩沖液MOPS乙酸鈉EDTAPCR 緩沖液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鮭魚精 DNATaq DNA
Northern－Blotting反應方法步驟
Northern雜合反應的步驟主要包括：（1） 加入核酸探針，使與固定于尼龍膜上的特定RNA 進行雜合反應；（2） 待雜合反應結束后以含鹽緩沖液與SDS 洗掉非專一性結合于尼龍膜上的核酸探針。 進行反應時應注意下列幾個問題：a. 實驗操作過程仍應盡可能避免RNase 的污染；b. 反應前應先進行雜合
我作NORTHERN的心得
我們試驗室作NORTHERN的一些總結，歡迎指正，謝謝。Northern雜交準備物品：50ml量筒1個 100ml量筒1個 300ml燒杯1個 250ml 燒杯1個 250ml的錐形瓶1個 10ml 離心管2個 大小盤各1個 鑷子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 電泳槽、轉膜槽
Northern雜交試驗指導手冊
Northern雜交試驗指導手冊DIG標記的Northern雜交試驗指導一、 RNA提取方法一、改良異硫氰酸胍提取法試劑及其配制異硫氰酸胍變性液：貯存液－在含484ml 水（經DEPC處理）, 17.6ml 0.75mol/L檸檬酸鈉（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入25
Northern－protocol(RULES－FOR－RNA－WORK)
1.???????? Wear gloves at all time including filling pipet tip in racks, filling jars with Eppendorf tubes, and weighing chemicals to prepare solution
Northern雜交步驟和過程
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
Northern－Blotting－實驗操作指南
實驗概要本文介紹了Northern Blotting實驗詳細操作流程。實驗材料1. 試劑盒提供NorthernMax (Formaldehyde-Based System for Northern Blots)[Catlog#1940]6ml?? -20℃????? Formaldehyde Loa
組織印跡的Northern雜交
組織印跡的Northern雜交1）硝酸纖維素膜或尼龍膜上的組織印跡1．在塑料板上放置兩層Whatman 1號濾紙，在濾紙上方放上一張普通紙，然后鋪上一層尼龍膜。2．用雙面刀片從植物組織如大豆的莖上切取一塊切片（厚度約為1mm）。如果組織表面是濕的，則在Kimwipes紙上輕輕吸干或先用蒸餾水洗滌幾秒
分子雜交——Northern基因檢測
實驗概要Northern雜交采用瓊脂糖凝膠電泳，將分子量大小不同的RNA分離開來，隨后將其原位轉移至固相支持物（如尼龍膜、硝酸纖維膜等）上，再用放射性（或非放射性）標記的DNA或RNA探針，依據其同源性進行雜交，最后進行放射自顯影（或化學顯影），以目標RNA所在位置表示其分子量的大小，而其顯影強度則
Northern雜交分析操作步驟
【操作】1．RNA的提取見前。2．變性膠的制備：取瓊脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加熱熔化，冷卻至 60℃時加入5×甲醛凝膠電泳緩沖溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混勻、制膠。待膠凝固后，置于1×甲醛凝膠電泳緩沖溶液中預電泳5min。3．樣品制備 取總RNA4.5 ，加入5
蛋白質印跡法
值得一提的是，western blot這個名稱的由來很有意思。最開始做印跡工作的是一個叫做Edwin Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern blot，后來類似的出現了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個針對蛋白質，人們分別把這兩種技
Southern－Blot
1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but mi
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern雜交試驗指導手冊(5)
?E.雜交建議雜交條件：探針濃度50~100ng/ml，溫度68℃過夜。1.將印跡膜置于裝有預雜交液的雜交袋中（每100cm2膜20ml預雜交液），封好雜交袋，在設定的雜交溫度下預雜交至少1小時。2.將探針在沸水浴中變性10min.(探針一經變性，立即使用)，用預雜交液稀釋成設定濃度。3.將雜交袋中