PCRArray簡單實用的檢測基因表達的高通量方法（二）
PCR芯片的設計和所包含的基因 96孔模式的每種RT2Profiler PCR芯片，含有基因特異性引物，可用于研究84個與某種信號通路或者疾病相關的基因。此外，芯片中還有設置了3個檢測實驗質量的對照。圖2為PCR芯片模式圖。由于每種芯片都是根據特別的信號通路或者特定的應用范圍設計的，研究者可以用它來研究自己感興趣的一組基因，一個生物學通路或者某種疾病狀態。PCR芯片所研究的基因范圍相對集中，大大節省了在數據分析方面所花費的時間，相對更簡潔針對性更強的信息也有利于接下來的更深入更準確的研究。因此，研究者使用PCR芯片，可以在更短的時間內得到更豐富的信息。此外，Superarray將相關基因設計在同一張PCR芯片內，為實驗準備階段也提供了方便。 圖二 PCR芯片示意圖 A1-G12孔包含了同一信號通路或者疾病的84個相關基因的引物（gene 1- gene 84）H1-H5孔包含了5個看家基因（HK1-HK5），用于芯......閱讀全文
RT2－Profiler－PCR－Arrays新手小技巧及注意事項
RT2 Profiler PCR Arrays新手小技巧及注意事項（做了幾百次PCR Array的Matt Finley博士的經驗之談） RNA純化和分析: 起始RNA樣品的質量是成功實驗的最重要的因素之一。我強烈推薦使用QIAGEN的RNA純化試劑盒來進行RNA純化。RNA樣品必須進行柱上DNa
快速可靠的甲基化分析，無需亞硫酸氫鹽轉化
在甲基化分析中，亞硫酸氫鹽轉化通常是必經之路。它將未甲基化的胞嘧啶轉化成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，之后再結合PCR、測序等技術分析甲基化狀態。聽上去似乎很簡單，但要想獲得漂亮的結果，卻并非那么容易。轉化效率如何?回收率如何?這都是需要考量和優化的因素。 最近，QIAGEN
輝瑞114億美元拿下靶向小分子藥物公司Array
輝瑞公司（紐約證券交易所股票代碼：PFE）和Array BioPharma Inc.（納斯達克股票代碼：ARRY）在6月17日宣布，輝瑞將以每股48美元、總企業價值約為114億美元的現金收購Array。在并購完成之后，雙方將專注于靶向小分子藥物的發現，開發以及商業化，用以治療癌癥和其它疾病。
Array將重獲諾華抗癌藥Binimetinib開發和營銷權
本周三，諾華與Array Biopharma公司簽署協議宣布，Array將重新獲得其抗癌藥物Binimetinib的開發和營銷權利。 Array重購Binimetinib將有可能促其獲得GSK的抗癌藥Mekinist：今年四月諾華宣布與葛蘭素史克（GSK）進行一項業務重組，
BioMark?基因分析系統介紹
美國Fluidigm公司www.fluidigm.com創立于1999年，總部設在美國加州。其創始人是Steve Quake和Gajus Worthington(公司CEO)。Steve Quake是美國斯坦福大學教授，是微液流領域（Microfluidic Technology）的權威專家http
趨化因子及其受體的功能介紹（四）
5 .5?趨化因子對組織細胞及腫瘤細胞的趨化作用趨化因子除了對免疫細胞有定向趨化作用外，對其它能夠表達相應趨化因子受體的組織細胞都具有趨化作用。如前面提到的ELR-CXC類趨化因子對內皮細胞的趨化作用。SDF-1對胚胎期神經細胞的趨化能力使之在中樞神經系統神經網絡的發育中起重要作用。長期以來一直有報
布魯克FluoroCycler－XT－PCR系統和FluoroType－MTBDR－2.0獲CEIVD標志
分析測試百科網訊 近日，布魯克宣布其用于檢測結核病（TB）和抗生素耐藥性的FluoroCycler XT PCR系統和FluoroType MTBDR 2.0 Liquid Array檢測已獲得CE-IVD標志。 根據布魯克的消息，基于PCR的MTBDR測試可在三小時內直接從患者樣本中識別病原
FAO通路通過抑制失巢凋亡促進結腸直腸癌細胞遠端轉移
中山大學附屬腫瘤醫院腫瘤研究所徐瑞華教授長期從事消化道腫瘤個體化治療及抗癌藥物研究。該課題組利用NuRNA? Human Central Metabolism PCR Array研究發現在非貼壁的結直腸癌細胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在轉移的腫瘤中，CPT1A表達上調，由CPT1A
DNA微陣列的常見類型
Stanford型由美國斯坦福大學開發的cDNA?array的制作方法，將預先合成好的核酸探針布放于玻片載體上。 優點：設計較長的探針長度可增加專一性。 缺點：芯片密度較光罩法低，并須有良好的保存設計。這種方法又可分為點制法與印制法。點制法是小規模生產或實驗室自制的低密度芯片，以機械手臂上帶有毛細作
DNA微陣類型的介紹
基因芯片的制作方式基本可分為以下幾型： Stanford型 由美國斯坦福大學開發的cDNA array的制作方法，將預先合成好的核酸探針布放于玻片載體上。 優點：設計較長的探針長度可增加專一性。 缺點：芯片密度較光罩法低，并須有良好的保存設計。 這種方法又可分為點制法與印制法。 點制法是
簡述DNA微陣類型的內容
基因芯片的制作方式基本可分為以下幾型： 1、Stanford型 由美國斯坦福大學開發的cDNA array的制作方法，將預先合成好的核酸探針布放于玻片載體上。 優點：設計較長的探針長度可增加專一性。 缺點：芯片密度較光罩法低，并須有良好的保存設計。 這種方法又可分為點制法與印制法。 點制
Troubleshooting－for－PCR－and－multiplex－PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
多重PCR（Multiplex－PCR）
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同.??? 多
PCR簡介/PCR儀
PCR的要素基本的PCR須具備PCR儀圖冊1.要被復制的DNA模板 Template2.界定復制范圍兩端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四種脫氧核苷酸）及水。 PCR儀工作原理利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈，進而達到基因復制
重疊PCR—overlap－PCR
1、簡介?重疊PCR也是基本的PCR原理：變性-退火-延伸。不同的是在重疊PCR過程是兩個或者幾個片段重疊延伸之后，再進行指數擴增的PCR過程。 ?2、基本原理*步：PCR產生兩個或者幾個片段，這幾個片段之間必須有重疊區。?第二步：以兩個片段為例，見上圖，*步產生的兩個片段，A D鏈之間有互補，B
多重PCR（Multiplex－PCR）
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同.??? 多
普通PCR梯度PCR－原位PCR－熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀： 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如；（ABI 2720） 梯度PCR儀： 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱
FAO通路通過抑制失巢凋亡促進結腸直腸癌細胞遠端轉移
中山大學附屬腫瘤醫院腫瘤研究所徐瑞華教授長期從事消化道腫瘤個體化治療及抗癌藥物研究。該課題組利用NuRNA? Human Central Metabolism PCR Array研究發現在非貼壁的結直腸癌細胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在轉移的腫瘤中，CPT1A表達上調，由CPT1A介導的
全基因組的比較基因組雜交技術介紹
Whole-Genome and Custom Fine-Tiling Array CGHComparative Genomic Hybridization (CGH) measures DNA copy number differences between a reference genome a
反轉錄PCR（RTPCR,－Reversed－Transcript－PCR）
1 原理 RT—PCR是一種將cDNA合成與PCR技術結合分析基因表達的快速靈敏的方法，主要用于對表達信息進行檢測或定量分析,還可以用來檢測基因表達差異而不必構建cDNA文庫克隆cDNA。RT-PCR的模板可以為總RNA或poly(A)+選擇性RNA。逆轉錄反應可以使用逆轉錄酶，以隨機引物、ol
反向PCR（inverse－PCR）簡介
反向PCR是一種多聚合酶鏈式反應（PCR）應用的方法，可使已知序列的核心區邊側的未知DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區的末端序列，但其方向可使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開
反向PCR－（inversePCR）
實驗方法原理 反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。?1. ?選擇合適的限制性內切酶位點。并在T-DNA的邊界（左邊界、右邊界均可）和酶切位點附近設計引物P1、P2；2. ?回收DNA，T4連接酶連接，使酶切后的DNA片段環化；3. ?回收連接后的DNA，用引物P1、P2做
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
反向PCR－（inversePCR）
利用反向PCR可對未知序列擴增后進行分析，探索鄰接已知DNA片段的序列，并可將僅知部分序列的全長cDNA進行分子克隆，建立全長的DNA探針。可用于：（1）基因游走研究；（2）轉位因子研究；（3）已知序列DNA旁側病毒整合位點分析等研究。實驗方法原理反向PCR可用于研究與已知DNA區段相連接的未知染色
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制備T
反向PCR－（inversePCR）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 反向PCR可用于研究與已知DNA區段相連接的未知染色體序列，因此又可稱為染色體緩移或染色體步移。這時選擇的引物雖然與核心DNA區兩末端序列互補，但兩引物3’端是相互反向的。擴增前先用限制性內切酶酶切樣品DNA，然后用DNA連接
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
PCR技術（十四）：反向PCR
描述一種大聚合酶鏈反應(PCR)應用的方法，使在已知序列的核心區邊側的未知 DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴 增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區 的末端序列，但其方向性，使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開引
Array三藥方案III期臨床獲得成功，被輝瑞$110億收購
Array BioPharma是一家專注于發現、開發和商業化小分子藥物治療癌癥的美國生物制藥公司。今年6月，輝瑞宣布以110億美元收購Array。近日，該公司公布了結直腸癌III期臨床研究BEACON CRC的數據。該研究在既往已接受一種或兩種療法的晚期BRAF V600E突變轉移性結直腸癌（m
NALP3炎性體與非感染性炎癥疾病及其通路研究工具
一、NALP3炎性體的結構和分布 NALP3炎性體是一類分子量約為700kDa的大分子蛋白復合體，由核苷酸結合寡聚化結構域樣受體（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors，NLRs）家族成員NALP3、銜接蛋白ASC